99TCm-VEGF126-136-MAG3受體顯像在骨肉瘤模型與炎癥模型中的對(duì)比研究.pdf

1、目的:建立人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型和金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)小鼠模型;應(yīng)用99Tcm標(biāo)記血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF125-136)多肽片段，觀察其在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型和炎癥反應(yīng)小鼠模型的體內(nèi)分布及SPECT顯像特征，對(duì)比分析99Tcm-VEGF125-136—MAG3在腫瘤與炎癥反應(yīng)兩種模型中的差別，探討99Tcm-VEGF125-136-MAG3早期診斷

2、腫瘤的可行性及特異性。
　　 方法:
　　 1、建立動(dòng)物模型
　　 1.1、人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型
　　 人骨肉瘤細(xì)胞MG63用含10％胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基在37℃，CO2體積分?jǐn)?shù)5％的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)傳代。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MG63細(xì)胞，胰蛋白酶消化后用DMEM高糖培養(yǎng)基制成細(xì)胞懸液，對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)并將細(xì)胞濃度調(diào)整為5×107/ml，無(wú)菌條件下0.2ml/只注射于BALB/c裸鼠的左前肢根部背側(cè)皮

3、下。
　　 1.2、金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)小鼠模型
　　 選取雌性、質(zhì)量20～25g的昆明小鼠，取生長(zhǎng)良好的金黃色葡萄球菌菌落，用滅菌蒸餾水配制成0.5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝粷舛?1×108cfu/ml)的菌液，按0.2ml/只注射于每只昆明小鼠的左前肢背側(cè)肌肉。
　　 2、99Tcm-VEGF125-136-MAG3在動(dòng)物模型的體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)
　　 2.1、99Tcm-VEGF125-136-MAG3在人骨肉瘤MG6

4、3荷瘤裸鼠的體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)
　　 選取20只瘤體形態(tài)規(guī)整，直徑為0.8-1cm的人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠，按隨機(jī)數(shù)字法將其分為4組，每組5只。每只裸鼠經(jīng)尾靜脈注入0.2ml約18.5MBq(0.5mCi)99Tcm-VEGF125-136-MAG3，分別于注射后0.5h、1h、2h、4h各處死一組荷瘤裸鼠，心臟取血后，取心、肝、脾、腎、小腸、骨骼、肌肉、腫瘤組織，生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分，電子天平準(zhǔn)確測(cè)量各器官組織質(zhì)量，γ計(jì)數(shù)器

5、計(jì)數(shù)各器官組織的放射性計(jì)數(shù)，同時(shí)測(cè)定相同時(shí)刻的標(biāo)準(zhǔn)源的放射性計(jì)數(shù)。計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)每克組織的百分注射劑量率(percentage activity of injection dose per gram of tissue,％ID/g)。同步測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的腫瘤組織(T)與對(duì)側(cè)肌肉組織(M)的放射性計(jì)數(shù)比值，即腫瘤組織/肌肉組織(target-to-muscle ratios，T/M)比值。
　　 2.299Tcm-VEGF125-1

6、36-MAG3在金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)小鼠的體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)
　　 選取20只生長(zhǎng)狀態(tài)良好，注射部位出現(xiàn)紅、腫、活動(dòng)障礙的金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)昆明小鼠，按隨機(jī)數(shù)字法將其分為4組，每組5只。用上述方法（荷瘤裸鼠模型體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)）對(duì)炎癥反應(yīng)組小鼠進(jìn)行體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)，并計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)每克組織的百分注射劑量率(percentage activity of injection dose per gram of tissue，％ID/g)。以炎癥

7、反應(yīng)組織作為靶組織(T)，同步測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)的炎癥組織(T)與對(duì)側(cè)肌肉組織(M)的放射性計(jì)數(shù)比值，即炎癥組織/對(duì)側(cè)肌肉組織T/M比值。
　　 3、99Tcm-VEGF125-136-MAG3在動(dòng)物模型的SPECT顯像實(shí)驗(yàn)
　　 3.1、另取5只入骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠，每只裸鼠經(jīng)尾靜脈注射0.2ml約18.5MBq(0.5mCi)的99Tcm-VEGF125-136-MAG3，分別于注射后0.5h、1h、2h、4h行SP

8、ECT靜態(tài)顯像。利用感興趣區(qū)技術(shù)(regionofinterest，ROI)以腫瘤組織對(duì)側(cè)肌肉作為非靶組織，計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)腫瘤組織與對(duì)側(cè)肌肉的放射性計(jì)數(shù)的比值(T/NT)。
　　 3.2、同樣的方法對(duì)炎性反應(yīng)組（5只）昆明小鼠進(jìn)行SPECT靜態(tài)顯像，并計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的T/NT比值。
　　 結(jié)果:
　　 1、動(dòng)物模型的觀察與鑒定
　　 1.1、人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型
　　 腫瘤細(xì)胞接種后，裸鼠

9、于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)(specific pathogen free，無(wú)特定病原體)環(huán)境下飼養(yǎng)。大約1-2周成瘤，3-4周肉眼觀察腫瘤長(zhǎng)至直徑約0.8-1cm。取少許腫瘤組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢驗(yàn)，證實(shí)為骨肉瘤組織。
　　 1.2、金黃色葡萄球菌炎癥反應(yīng)模型
　　 注射48h后，菌液注射部位的肌肉出現(xiàn)紅、腫、活動(dòng)障礙。取少許注射部位肌肉組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢驗(yàn)，證實(shí)為炎癥反應(yīng)組織。299Tcm-VEGF125-136-MAG3

10、在動(dòng)物模型的體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)
　　 99Tcm-VEGF125-136-MAG3在人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠模型的腎臟中放射性分布最高，其次是小腸和肝臟，提示標(biāo)記物主要經(jīng)腎臟排泄，其次為消化道。其它組織中放射性分布較少。腫瘤組織在各時(shí)間點(diǎn)均有較高的放射性攝取，1h時(shí)攝取最高。
　　 在炎性反應(yīng)小鼠體內(nèi)腎臟放射性分布最高;其次是小腸和肝臟;其它組織中放射性分布較少。炎癥反應(yīng)組織各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)明顯的放射性攝取。
　　 對(duì)人骨

11、肉瘤MG63荷瘤裸鼠組與炎性反應(yīng)組各時(shí)間點(diǎn)T/M值比較顯示:腫瘤組各時(shí)間點(diǎn)T/M值均高于炎性反應(yīng)組，其中注射后1h腫瘤組與炎性反應(yīng)組T/M比值分別為3.04±0.07和1.26±0.37，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.70，P＜0.05)。
　　 3、99Tcm-VEGF125-136-MAG3在動(dòng)物模型的SPECT顯像實(shí)驗(yàn)
　　 人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠組，99Tcm-VEGF125-136-MAG3在腫瘤部位可見(jiàn)放射性

12、聚集，0.5h、1h、2h、4h各組中于1h時(shí)腫瘤顯像最清晰。注射99Tcm-VEGF125-136-MAG30.5h后腎、肝臟及腸道等組織可見(jiàn)明顯顯影，隨時(shí)間延長(zhǎng)，腎、肝臟及腸道等組織顯影逐漸變淡。腦、甲狀腺及肌肉未見(jiàn)明顯顯影。
　　 炎性反應(yīng)小鼠組，炎癥反應(yīng)部位各時(shí)間點(diǎn)顯影均較淡，無(wú)明顯的99Tcm-VEGF125-136-MAG3攝取。注射后0.5h腹腔顯影明顯，隨時(shí)間延長(zhǎng)顯影逐漸變淡，腦、甲狀腺及肌肉等組織未見(jiàn)明顯放射性

13、攝取。
　　 利用ROI法測(cè)得人骨肉瘤MG63荷瘤裸鼠組與炎性反應(yīng)組各時(shí)間點(diǎn)T/NT值顯示:腫瘤組各時(shí)間點(diǎn)T/NT值均高于炎性反應(yīng)組，其中注射后1h腫瘤組與炎性反應(yīng)組T/NT比值分別為3.10±0.19和1.34±0.55，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.73，P＜0.05)。
　　 結(jié)論:99Tcm-VEGF125-136-MAG3可被荷瘤裸鼠高表達(dá)VEGFR的腫瘤組織攝取，在炎癥反應(yīng)組織攝取不明顯;SPECT顯像示99Tc