三磷酸腺苷水解酶CD39誘導(dǎo)小鼠肝移植免疫耐受的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 小鼠原位肝臟移植模型的建立
　　目的：建立袖套法不重建動脈的小鼠異基因原位肝臟移植模型，為進(jìn)一步進(jìn)行移植免疫學(xué)研究提供適合的模型保障。
　　方法：繪制模型的學(xué)習(xí)周期示意圖，分析手術(shù)成功關(guān)鍵因素及技巧，分析無肝期長短對動物長期生存率的影響。在血清學(xué)水平、組織學(xué)角度初步評估術(shù)后移植物狀態(tài)。
　　結(jié)果：通過6個周期學(xué)習(xí)周期，建立了穩(wěn)定的小鼠肝移植模型，最后1個學(xué)習(xí)周期內(nèi)1

2、0只小鼠的1周、2周、100天生存率分別為100％，90％，60％。供、受體手術(shù)時(shí)間分別為（44.3±5.0）min和（90.0±8.5）min，其中無肝期平均（21.4±2.5）min。無肝期長短顯著影響術(shù)后長期生存率。
　　結(jié)論：本方法建立的小鼠肝臟移植模型穩(wěn)定可靠。通過反復(fù)訓(xùn)練來縮短無肝期是模型成功的關(guān)鍵因素。
　　第二部分 移植物基因差異、保存時(shí)間及病毒感染狀態(tài)對小鼠肝移植預(yù)后的影響
　　目的：借助袖套法不重建

3、動脈的小鼠異基因原位肝臟移植模型，進(jìn)一步從供受體基因差異、移植物保存時(shí)間、移植物病毒感染狀態(tài)等方面進(jìn)一步初步探討其對移植物影響，通過更加貼近臨床肝移植設(shè)置，充分挖掘該模型潛在的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值。
　　方法：分別建立同基因小鼠肝移植免疫耐受模型、異基因小鼠肝移植免疫耐受模型、同基因長時(shí)間冷缺血再灌注模型、異基因長時(shí)間冷缺血再灌注模型、病毒感染供肝的肝移植24h缺血再灌注模型。在模型之間行恰當(dāng)?shù)臋M向比較。
　　結(jié)果：同基因及異基因小

4、鼠肝臟移植模型均能誘導(dǎo)建立穩(wěn)定的免疫耐受，生存率>100天；經(jīng)24h移植物冷缺血保存后，移植術(shù)后6h均出現(xiàn)嚴(yán)重的IR損傷。異基因小鼠肝移植術(shù)后6h的ALT、AST血清學(xué)水平明顯高于同基因肝移植小鼠(P<0.05)。術(shù)前3天經(jīng)Adenovirus病毒攜帶Scramble RNA的質(zhì)粒1×109PFU感染供體肝細(xì)胞的受鼠，與同型對照組相比術(shù)后6h的ALT、AST血清學(xué)水平明顯升高(P<0.01)。
　　結(jié)論：異基因小鼠（C57BL/6

5、 to C3H）之間也能建立穩(wěn)定的免疫耐受。但相比同基因小鼠，異基因小鼠之間的冷缺血再灌注損傷更加嚴(yán)重。接受病毒感染供肝的受鼠與同型對照組比較，缺血再灌注損傷加劇。
　　第三部分 三磷酸腺苷水解酶CD39對小鼠肝移植免疫耐受的影響及其機(jī)制研究
　　目的：討論CD39對小鼠肝移植免疫耐受的影響，并對其機(jī)制進(jìn)行細(xì)胞學(xué)水平探討。
　　方法：采用異基因小鼠肝臟移植免疫耐受模型，借助CD39基因敲除小鼠。闡明CD39基因敲除移植

6、物對受鼠長期生存率，急性排斥反應(yīng)的影響。進(jìn)一步對比分析受鼠的免疫細(xì)胞水平及抗移植物排斥反應(yīng)狀態(tài)，闡明CD39在誘導(dǎo)肝移植免疫耐受過程中的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：接受CD39KO移植物受鼠無法獲得長期生存率，中位生存時(shí)間為11天；分析術(shù)后第5天急性排斥反應(yīng)程度，CD39KO移植物RAI評分明顯高于WT移植物（5.4±0.5 vs.4.0±0.3, p=0.048）。CFSE-MLR實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CD39KO受鼠有更強(qiáng)的抗移植物排斥反應(yīng)；流