黃芪甲苷對(duì)D-GalN-LPS誘導(dǎo)小鼠急性肝衰竭模型Nrf2-HO-1和Bcl-2-Bax表達(dá)的影響.pdf

1、背景：ALF病死率極高，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，至今尚無有效藥物治療。越來越多的證據(jù)表明氧化應(yīng)激是急性肝損傷的重要機(jī)制之一。核轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子 Nrf2是調(diào)節(jié)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)錄因子，可能是ALF治療的重要靶點(diǎn)。AS-Ⅳ的抗氧化作用如今已得到公認(rèn)，但對(duì)ALF是否有保護(hù)作用，及對(duì)氧化應(yīng)激關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子Nrf2是否有調(diào)控作用目前國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。
　　目的：觀察 AS-Ⅳ對(duì)D-GalN/LPS誘導(dǎo)小鼠急性肝衰竭模型的保護(hù)作用，及對(duì)Nrf2/HO-

2、1和Bcl-2/Bax表達(dá)的影響，探索AS-Ⅳ在ALF中的抗氧化、抗凋亡的作用機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分兩部分。第一部分將70只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組，模型組，AS-Ⅳ低、中、高劑量干預(yù)組，其中正常對(duì)照組10只，余每組15只。干預(yù)組分別給予低、中、高劑量AS-Ⅳ預(yù)處理3天，正常對(duì)照組和模型組僅給予助溶劑預(yù)處理，然后正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，余4組分別給予D-GalN/LPS腹腔注射，建立ALF小鼠模型，觀察造模

3、后48h內(nèi)各組小鼠的癥狀和生存情況，清點(diǎn)各時(shí)點(diǎn)小鼠的存活數(shù)，繪制生存曲線，進(jìn)行生存分析。第二部分將50只C57BL/6小鼠隨機(jī)分為5組（同上），每組10只。造模及AS-Ⅳ預(yù)處理同上，于造模后6h處死全部存活小鼠，留取血清標(biāo)本，檢測(cè)ALT、AST水平；觀察肝臟的大體形態(tài)，HE染色，進(jìn)行肝組織病理程度分析；TUNEL法檢測(cè)肝組織凋亡指數(shù)；采用Real-Time PCR檢測(cè)肝組織Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mR

4、NA的表達(dá)；采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定SOD活力，硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA含量；Western Blot技術(shù)檢測(cè)肝組織Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）與模型組比較，AS-Ⅳ高劑量組小鼠48h存活率明顯提高（60％vs13.3%， p<0.05）；AS-Ⅳ中、高劑量組小鼠血清ALT水平（1889.00±980.11 vs7435.20±2493.07和154.11±69.18 vs

5、7435.20±2493.07， p<0.01）、AST水平(1310.00±134.35 vs4369.80±1960.90和146.65±76.41 vs4369.80±1960.90，p<0.01)明顯降低，肝組織病理指數(shù)明顯改善（0.19±0.13 vs0.40±0.00和0.11±0.08 vs0.40±0.00，p<0.01）；（2）與模型組比較，AS-Ⅳ低、中、高劑量組肝勻漿 MDA含量均顯著降低（86.03±4.38 v

6、s105.73±9.09、56.62±14.11 vs105.73±9.09和41.79±5.05 vs105.73±9.09，p<0.01）；AS-Ⅳ高劑量組肝勻漿 SOD活力明顯增強(qiáng)（81.90±18.58 vs61.16±7.85，p<0.05），肝組織Nrf2蛋白相對(duì)表達(dá)量（1.15±0.28 vs0.42±0.02，p<0.01）、HO-1蛋白相對(duì)表達(dá)量（1.28±0.14 vs0.50±0.06， p<0.01）以及 Nrf

7、2 mRNA相對(duì)表達(dá)量（1.07±0.25 vs0.29±0.10，p<0.01）、HO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量（5.85±0.36 vs1.06±0.14，p<0.01）均顯著增高。（3）與模型組比較，AS-Ⅳ低、中、高劑量組肝細(xì)胞凋亡指數(shù)均明顯改善（8.6%±5.2%vs25.1%±11.2%、5.0%±2.7%vs25.1%±11.2%和1.8±0.8%vs25.1%±11.2%，p<0.05）；AS-Ⅳ中、高劑量組Bcl-2/B

8、ax蛋白比值（1.39±0.18 vs0.30±0.13和1.95±0.25 vs0.30±0.13，p<0.01）以及Bcl-2/Bax mRNA比值（0.82±0.08 vs0.55±0.10和0.92±0.14 vs0.55±0.10， p<0.01）均明顯增強(qiáng)，而 Caspase-3蛋白相對(duì)表達(dá)量（2.72±0.16 vs4.65±0.43和1.86±0.15 vs4.65±0.43，p<0.01）以及Caspase-3 mRN