基于FRET原理的雙激發(fā)pH熒光比率探針的合成及光譜性能研究.pdf

1、隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展與社會(huì)的進(jìn)步，熒光比率技術(shù)已經(jīng)成為熒光分析法中最重要的一項(xiàng)技術(shù)。熒光比率技術(shù)就是利用兩個(gè)熒光發(fā)射峰的比率來(lái)對(duì)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，同常規(guī)的熒光探針相比，該探針最明顯的優(yōu)勢(shì)在于能夠消除探針?lè)肿訚舛纫约疤结樂(lè)肿铀幍沫h(huán)境等因素帶來(lái)的誤差，同時(shí)該探針大大增加了響應(yīng)的范圍，能夠提供更加精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，給人們研究物質(zhì)的性質(zhì)帶來(lái)了極大地方便。因此，熒光比率探針得到了極大地發(fā)展。
　　雙激發(fā)熒光比率探針就屬于熒光比率探針中的一種，該探

2、針要求在兩個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)下熒光強(qiáng)度較強(qiáng)，且能很好地消除探針?lè)肿铀幍沫h(huán)境所帶來(lái)的誤差。然而，現(xiàn)報(bào)道的小分子雙激發(fā)熒光比率探針受制于諸多因素：如兩個(gè)激發(fā)帶之間的距離相距較短(20-70 nm)，在一個(gè)激發(fā)波長(zhǎng)下有很小的消光系數(shù)等缺點(diǎn)。這些缺點(diǎn)導(dǎo)致其在檢測(cè)熒光比率強(qiáng)度時(shí)出現(xiàn)誤差，為實(shí)驗(yàn)帶來(lái)極大地不便。因此，希望設(shè)計(jì)一種新型的小分子雙激發(fā)熒光比率探針，該探針的受體與供體之間激發(fā)帶相距較遠(yuǎn)，同時(shí)，該探針在檢測(cè)熒光比率強(qiáng)度時(shí)能夠達(dá)到很高的要求，并能使

3、信號(hào)強(qiáng)度在動(dòng)力學(xué)范圍內(nèi)得到大幅度地提高?；谏鲜隼碛?，基于FRET原理，設(shè)計(jì)合成了一種新型的香豆素-羅丹明熒光探針，該探針是第一個(gè)基于FRET原理的雙激發(fā)熒光比率探針，該探針不僅熒光強(qiáng)度較強(qiáng)，而且兩個(gè)激發(fā)帶之間相距較遠(yuǎn)(激發(fā)波長(zhǎng)相差>160 nm)。在本文中，在此基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)合成了一種檢測(cè)pH值的熒光比率探針，能很好地受到空間與時(shí)間的控制，同時(shí)該熒光比率探針是一種安全可靠的比率模型。在本實(shí)驗(yàn)中，檢測(cè)了外界pH值的變化對(duì)探針光譜性能的影響