禽蛋膽固醇檢測方法的研究及應(yīng)用.pdf

1、禽蛋中膽固醇含量很高，多數(shù)消費(fèi)者對(duì)其食用有所顧慮。目前關(guān)于禽蛋膽固醇在人體內(nèi)的代謝機(jī)制尚不明確，但準(zhǔn)確測定出禽蛋膽固醇含量是十分必要的。目前，國內(nèi)還沒有針對(duì)禽蛋膽固醇檢測的標(biāo)準(zhǔn)化方法，本課題對(duì)超聲波輔助皂化結(jié)合RP-HPLC檢測蛋黃膽固醇的方法進(jìn)行了優(yōu)化，建立了分散固相萃取結(jié)合RP-HPLC檢測蛋黃膽固醇方法，并對(duì)這兩種方法進(jìn)行了比較，研究分析了不同種類禽蛋及蛋制品中膽固醇含量，并對(duì)孵化期間受精蛋蛋黃中膽固醇含量變化規(guī)律進(jìn)行了研究。主要

2、結(jié)果如下:
　　 超聲波輔助皂化提取蛋黃膽固醇的最佳反應(yīng)條件是:皂化溫度70℃，皂化時(shí)間30 min，超聲波功率500 W，同時(shí)優(yōu)化了RP-HPLC檢測蛋黃膽固醇的色譜條件。在這些條件下，樣品12min內(nèi)完成分離，線性范圍為0.106～1.06 mg/mL，相關(guān)系數(shù)＞0.99，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明:該方法精密度（RSD為3.27％）、重現(xiàn)性（RSD為3.40％）及加標(biāo)回收率（回收率范圍82.8％～94.6％，RSD為4.35％）的

3、RSD均較小，方法檢測限可達(dá)33.3 mg/kg（換算成實(shí)際樣品重量），表明該方法精密度良好，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，而且樣品待測液在15 h是比較穩(wěn)定的（RSD為2.11％）。
　　 采用上述方法測定了九斤黃褐殼雞蛋、白來航白殼雞蛋、烏雞蛋、綠殼雞蛋、土雞蛋、低膽固醇雞蛋、鴨蛋、鵪鶉蛋這八種禽蛋的膽固醇含量。其中，土雞蛋膽固醇含量最大（241.85 mg/枚），鵪鶉蛋含量最低（45.32 mg/枚）(P＜0.05)。

4、>　　 但是研究過程中逐漸發(fā)現(xiàn)上述前處理方法，有機(jī)試劑消耗量大、前處理耗時(shí)較長，不適合批量、快速檢驗(yàn)。為此，我們通過單因素和正交實(shí)驗(yàn)方法對(duì)分散固相萃取蛋黃膽固醇前處理方法進(jìn)行了優(yōu)化，得到最佳反應(yīng)條件為:蛋黃液與異丙醇的料液比1∶20，濃氨水用量4.0 mL、2 mol/L KOH甲醇溶液2.0 mL，(NH4)2SO4用量8 g，吸附劑為NH2，并優(yōu)化了RP-HPLC檢測膽固醇含量的色譜條件。在此條件下，前處理僅需15min，待測液1

5、5 min內(nèi)完成分離，線性范圍為0.1036～1.036 mg/mL，相關(guān)系數(shù)＞0.99。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明:該方法精密度(RSD為3.06％)、重現(xiàn)性（RSD為3.03％）及加標(biāo)回收率（回收率范圍93.8％～102.5％）的RSD均較小，方法檢測限可達(dá)30.63 mg/kg（換算成實(shí)際樣品重量），表明該方法精密度良好，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，而且樣品待測液在24 h是比較穩(wěn)定的（RSD為2.09％）。
　　 分散固相萃取法

6、將萃取純化和結(jié)合態(tài)膽固醇的水解同時(shí)進(jìn)行，簡化了試驗(yàn)操作步驟。有機(jī)溶劑用量少，進(jìn)樣分析前不需要蒸發(fā)濃縮，而且在室溫下皂化，能有效避免因膽固醇發(fā)生氧化而造成的膽固醇測定值偏低的現(xiàn)象。最后對(duì)上述兩種方法進(jìn)行了比較，測定結(jié)果基本一致，但分散固相萃取法可以明顯縮短前處理時(shí)間，有效提高分析效率。
　　 研究表明，受精蛋和非受精蛋在孵化條件下，蛋黃膽固醇總量均隨孵化時(shí)間增加而逐漸降低，但是這兩種蛋膽固醇的變化規(guī)律有所不同。就受精蛋而言，孵化0

7、-2 d，曲線較為平緩，蛋黃中膽固醇總量幾乎不變，隨后下降速度逐漸加快。13-21 d的下降速率明顯快于4-13 d(P＜0.05)，出雛時(shí)膽固醇總量降至93.32mg，僅為入孵前的42.88％。就非受精蛋而言，孵化0-13 d曲線較為平緩，蛋黃中膽固醇總量幾乎不變，13 d以后，下降速度逐漸加快。21d時(shí)膽固醇總量降至134.13mg，相當(dāng)于入孵前的65.23％。揭示了孵化期間受精蛋與非受精蛋膽固醇總量變化的差異，相關(guān)性分析表明:受精

8、蛋膽固醇總量的變化與雞胚重量極顯著負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.9569，P＜0.01），與蛋黃脂肪總量極顯著正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)為0.9638，P＜0.01），與胚盤DNA含量極顯著負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.8460，P＜0.01），與失重率顯著顯著負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.7088，P＜0.05）初步證實(shí)了受精蛋中蛋黃膽固醇總量變化與雞胚生長狀況、脂類代謝速度具有一定相關(guān)性。
　　 禽蛋制品中的膽固醇含量會(huì)因加工方式的不同而不同。鮮鴨蛋經(jīng)加工制成咸鴨