擬蜘蛛牽絲蛋白基因細(xì)毛羊毛囊特異表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系的建立.pdf

1、蜘蛛絲是自然界具有最優(yōu)異力學(xué)性能的生物纖維，主要成分為蛛絲蛋白，但是難以大量生產(chǎn)或收集。利用基因工程手段可實(shí)現(xiàn)蛛絲蛋白基因轉(zhuǎn)入異源宿主中并表達(dá)。本實(shí)驗通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將蜘蛛牽絲蛋白基因真核表達(dá)載體pK-2S轉(zhuǎn)入美利奴細(xì)毛羊胎兒皮膚成纖維細(xì)胞中，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)入蛛絲蛋白基因的細(xì)胞株，通過DNA，RNA水平的檢測初步鑒定基因是否轉(zhuǎn)入細(xì)胞并表達(dá)，為培育能生產(chǎn)含有蛛絲蛋白羊毛的綿羊新品種奠定基礎(chǔ)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴以已發(fā)表的棒絡(luò)新婦

2、蛛cDNA片段為模板，人工合成擬蜘蛛牽絲蛋白基因單體(S)，并獲得二聚體(2S)。⑵建立了新疆美利奴細(xì)毛羊胎兒成纖維細(xì)胞系，細(xì)胞形態(tài)觀察顯示細(xì)胞形態(tài)良好，生長曲線表明細(xì)胞增殖狀態(tài)較好，核型分析正常。⑶克隆了綿羊毛囊特異性表達(dá)啟動子Kap6.1，構(gòu)建表達(dá)載體pKap-EGFP并轉(zhuǎn)入細(xì)毛羊胎兒皮膚成纖維細(xì)胞中并表達(dá)綠色熒光蛋白，表明啟動子具有表達(dá)活性。⑷以pEGFP-N1為框架，將2S與綿羊毛囊特異性啟動子Kap6.1相連，構(gòu)建毛囊特異表達(dá)