內(nèi)生菌G22生產(chǎn)皂苷的特性及作為誘導(dǎo)子對人參培養(yǎng)根的影響.pdf

1、人參皂苷(Ginsenoside)是名貴中草藥人參的主要藥用成分，在醫(yī)藥行業(yè)具有重要價(jià)值。由于人參資源的緊缺，市場需求日益加大，導(dǎo)致人參皂苷供不應(yīng)求。為提高人參皂苷產(chǎn)量，滿足市場需求，本研究通過對產(chǎn)皂苷的龍牙楤木內(nèi)生真菌G22發(fā)酵生產(chǎn)人參皂苷和利用茉莉酸甲酯(MeJA)誘導(dǎo)G22提高皂苷積累量進(jìn)行了相關(guān)的研究，同時(shí)探討了G22作為誘導(dǎo)子及其與人參培養(yǎng)根共培養(yǎng)提高人參的產(chǎn)皂苷能力，為利用G22生產(chǎn)人參皂苷及作為誘導(dǎo)子誘導(dǎo)人參培養(yǎng)根皂苷合成

2、量提供理論支持和進(jìn)一步優(yōu)化生產(chǎn)的技術(shù)指導(dǎo)。同時(shí)還建立了適用于G22和人參培養(yǎng)根的HPLC測定皂苷體系。
　　(1)高效液相色譜法(HPLC)體系的建立
　　為了同時(shí)測定人參培養(yǎng)根及內(nèi)生真菌G22中10種人參皂苷單體的含量，建立了新的高效液相色譜法。液相體系如下，Waters Symmetry C18 Synergi色譜柱（250 mm×4.6mm，5μm），柱溫30℃，以乙腈為流動相A，超純水為流動相B進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長

3、203 nm，進(jìn)樣量10μL，結(jié)果10種人參皂苷色譜峰基本分離，且線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性良好，其平均回收率在95.07％～108.72％之間。本實(shí)驗(yàn)方法快速簡便，重現(xiàn)性好，可以對人參培養(yǎng)根及內(nèi)生真菌G22中人參皂苷含量進(jìn)行多指標(biāo)質(zhì)量控制。
　　(2)G22合成人參皂苷特性的研究
　　本研究選擇常用的4種真菌培養(yǎng)基對G22產(chǎn)皂苷能力的影響，以確定G22產(chǎn)皂苷最佳培養(yǎng)基及最佳收獲時(shí)間，同時(shí)研究誘導(dǎo)子MeJA對G22生產(chǎn)

4、皂苷的影響。結(jié)果表明高氏Ⅰ號培養(yǎng)基為G22合成皂苷的最佳培養(yǎng)基，而Rb1、Rd的最佳生產(chǎn)培養(yǎng)基為馬丁氏培養(yǎng)基?？傮w上看MeJA的添加會抑制G22總皂苷及單體皂苷的合成，但某一濃度的MeJA會針對性的提高Rg1、Rg3、F2的產(chǎn)量，如Rg1在100μmol/L MeJA誘導(dǎo)下產(chǎn)量最多，Rg3在50μmol/L MeJA誘導(dǎo)下積累量最大，而F2在本實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)條件下還未達(dá)到合成最大值，需進(jìn)一步探索。
　　(3)G22與人參培養(yǎng)根共培養(yǎng)，G

5、22為誘導(dǎo)子對人參培養(yǎng)根皂苷合成的影響
　　本研究主要探討G22提高人參培養(yǎng)根的產(chǎn)皂苷能力，達(dá)到低成本大規(guī)模生產(chǎn)人參皂苷的目的。通過G22作為與人參培養(yǎng)根共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，G22與人參培養(yǎng)根共培養(yǎng)會抑制人參生物量的積累，300μL菌液對人參總皂苷、Rb1、Rh2的誘導(dǎo)促進(jìn)作用最大，產(chǎn)量分別達(dá)到了13.69 mg/g、0.33 mg/g、0.05 mg/g。
　　通過誘導(dǎo)子誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)可知，本實(shí)驗(yàn)中誘導(dǎo)子的添加會抑制人參培養(yǎng)根的生長