苦瓜色素與色素蛋白的提取及生物學(xué)特性的研究.pdf

1、苦瓜（MomordicacharantiaL.）系葫蘆科草本植物，富含多種營(yíng)養(yǎng)成分，作為一種傳統(tǒng)的蔬菜和中藥，具有藥膳同源之功效。其子衣色素可以作為一種天然食用色素，廣泛應(yīng)用于食品、日化、醫(yī)藥等行業(yè)。不僅可作為添加劑為食品著色，有的品種由于保留了植物體內(nèi)的多種天然活性物質(zhì)，如維生素、氨基酸、核苷酸、小分子活性肽、芳香物質(zhì)及某些必需元素等，還兼有營(yíng)養(yǎng)保健功能。本試驗(yàn)以不同成熟度苦瓜子衣為材料，應(yīng)用硫酸銨沉淀法和雙水相提取法均得到苦瓜色素蛋

2、白;經(jīng)過DEAE-52陰離子層析、SephadexG-100凝膠柱層析進(jìn)一步分離純化苦瓜色素蛋白;同時(shí)運(yùn)用生化-分子生物學(xué)技術(shù)研究純化苦瓜色素蛋白的生物學(xué)特性及抗氧化性。主要試驗(yàn)結(jié)果有:
　　 1.通過紫外可見吸收光譜圖可以得出苦瓜色素的最大吸收波長(zhǎng)為474nm，由正交試驗(yàn)可以確定苦瓜子衣色素提取的最佳條件為:溫度50℃，料液比為1/40g/ml，時(shí)間為30min時(shí)苦瓜色素的提取率最高為45.54％。
　　 2.純化苦瓜

3、子衣色素具有較好的穩(wěn)定性。但是高溫、強(qiáng)光照、在偏酸或偏堿的環(huán)境、氧化劑還原劑的存在，以及高濃度的金屬離子都會(huì)對(duì)苦瓜子衣色素的穩(wěn)定性構(gòu)成威脅，因此提取時(shí)要盡量避免。
　　 3.通過薄層層析可以得出苦瓜子衣色素中有至少有兩種比較多的色素:β-胡蘿卜素和番茄紅素。
　　 4.40％、40％-80％硫酸銨分級(jí)制備蛋白SDS-PAGE凝膠電泳結(jié)果顯示:40％硫酸銨沉淀蛋白主要含有一種，分子量約為20kD;即沒有差異條帶。而40％-

4、80％硫酸銨出多種蛋白質(zhì)并且包含差異條帶。用雙水相法提取的各階段的蛋白質(zhì)SDS-PAGE凝膠電泳，二者均用凝膠處理軟件BandScan5.0對(duì)圖像進(jìn)行處理，結(jié)果均發(fā)現(xiàn)目的條帶。
　　 5.40％-80％硫酸銨沉淀的蛋白上DEAE纖維素柱，得到兩個(gè)吸收峰，再過SephadexG-100柱進(jìn)一步純化得到目的蛋白，SDS-PAGE電泳圖片顯示:純化苦瓜色素蛋白的分子量為74.1kD，等電點(diǎn)為7.2，存在鏈間二硫鍵。
　　 6.

5、純化苦瓜色素蛋白和40％-80％硫酸銨沉淀蛋白清除羥自由基的能力相差不大。都是隨著質(zhì)量濃度的增加抗氧化性增強(qiáng)，但是，前者在同等的質(zhì)量濃度下均稍弱于后者。二者均不及抗壞血酸的抗氧化性。
　　 本研究確立了苦瓜色素的最佳提取條件，對(duì)子衣色素進(jìn)行了的定性分析以及對(duì)色素穩(wěn)定性進(jìn)行了探究，分離純化出與色素形成相關(guān)聯(lián)的色素蛋白，并得出了其生物學(xué)特性，和抗氧化性的效果，因此色素形成與色素蛋白存在密切相關(guān)，色素蛋白在色素形成中的作用機(jī)理有待探討