小鼠卵巢及早期胚胎發(fā)育過程中SNAIL和SLUG的表達與功能研究.pdf

1、哺乳動物的妊娠取決于卵泡的發(fā)育,卵母細(xì)胞的成熟、排卵,受精過程,胚胎的發(fā)育及著床等,這些過程是由許多基因和信號分子調(diào)控的。SNAIL和SLUG屬于SNAIL鋅指轉(zhuǎn)錄因子超家族的成員,參與調(diào)控細(xì)胞分裂,細(xì)胞存活,中胚層的形成及上皮-間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)換(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)等過程。目前對于SNAIL和SLUG的研究主要集中在遷移的組織中,例如原條,中胚層,肺,腎,肢芽等。但是對于SN

2、AIL和SLUG在卵巢及早期胚胎中的表達及功能還不為人知。在本實驗中,我們以新生小鼠,促性腺激素誘導(dǎo)的未成熟的小鼠及早期胚胎為研究對象,利用酶連免疫組織化學(xué)、激光共聚焦顯微技術(shù)及Western-blot等實驗方法,研究SNAIL和SLUG在卵泡發(fā)育,排卵,黃體化及早期胚胎發(fā)育過程中的表達情況,進而推斷它們在這些過程中所發(fā)揮的作用。另外,本文還對SNAIL和SLUG在GVBD期的卵母細(xì)胞中的定位做了研究。
　　結(jié)果顯示:SNAIL在

3、出生后1天(postnatal day1,PD1)及卵泡發(fā)育的早期階段(出生后1-5天)僅在卵巢上皮細(xì)胞有表達,直到出生后6天的間質(zhì)細(xì)胞及膜細(xì)胞中開始有表達,之后在出生后8天的卵母細(xì)胞中開始表達。從出生后8天開始一直在上皮細(xì)胞,膜細(xì)胞,間質(zhì)細(xì)胞及卵母細(xì)胞中表達,但是在顆粒細(xì)胞中一直沒有表達。與SNAIL表達不同, SLUG除在出生后1天的小鼠卵巢的上皮細(xì)胞有表達外,還在卵母細(xì)胞中有表達,隨著卵泡的發(fā)育,在出生后6天的膜細(xì)胞,間質(zhì)細(xì)胞中表

4、達,同樣在顆粒細(xì)胞中始終沒有表達。在激素誘導(dǎo)的未成熟的小鼠卵巢發(fā)育過程中,SNAIL不僅在腔前卵泡,有腔卵泡及成熟卵泡的卵母細(xì)胞,間質(zhì)細(xì)胞及膜細(xì)胞中持續(xù)表達,還在排卵后生成的黃體細(xì)胞中有強烈的表達,但是隨著黃體的退化,表達水平下降。SLUG在激素誘導(dǎo)的未成熟的小鼠卵泡發(fā)育過程中的表達情況與SNAIL相同,同樣,在排卵后形成的黃體中也有表達,并且發(fā)現(xiàn)是從新生黃體的外圍逐漸向內(nèi)部表達,伴隨著黃體的退化,表達量下降。Western-blot結(jié)

5、果顯示,在激素處理的未成熟的小鼠在卵泡生長,成熟,排卵及黃體生成的過程中, PMSG0 h,24 h,48 h以及hCG4 h,10 h,11 h,12 h,24 h這8個時間點,SNAIL和SLUG的表達量變化不大,但是在hCG48 h的黃體中表達量減少,這與我們免疫組化中的結(jié)果一致。我們發(fā)現(xiàn)在GVBD期的卵母細(xì)胞中,SNAIL和SLUG在除核仁以外的整個卵母細(xì)胞中都有表達。在小鼠早期胚胎發(fā)育過程中SNAIL定位在1-8胚胎的細(xì)胞核和

6、細(xì)胞質(zhì)中,但是仍然在核仁中沒有表達,在桑椹胚期,SNAIL在細(xì)胞質(zhì)中表達,而在囊胚期 SNAIL在細(xì)胞核中表達,并且在囊胚后期的滋養(yǎng)外胚層及內(nèi)細(xì)胞團的細(xì)胞核中一直有表達。在小鼠早期胚胎發(fā)育過程中,SLUG定位于1-8細(xì)胞胚胎的細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)中,核仁中沒有表達,而在桑葚胚及整個囊胚期中SLUG僅定位于細(xì)胞質(zhì)中。
　　綜上所述,我們認(rèn)為SNAIL和SLUG在卵巢發(fā)育及早期胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用,但是由于它們的表達情況不完全相同