魚精蛋白包覆PLA納米囊用于疫苗載體的初步研究.pdf

1、高分子材料聚乳酸（PLA）由于其具有良好的生物相容性和生物可降解性，已被廣泛用于納米載藥系統(tǒng)的研究。目前研究表明，顆粒性抗原可比可溶性抗原誘導(dǎo)更強(qiáng)的免疫反應(yīng)，且納米囊表面修飾正電荷后，易于被細(xì)胞攝取。本文將魚精蛋白包（PS）覆于載卵清白蛋白（OVA）的PLA納米囊表面，考察其對(duì)小鼠源性樹突狀細(xì)胞（BMDC）的免疫效應(yīng)。本文主要開展了以下工作：
　?。?）復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備載OVA的PLA納米囊，采用單因素方法，以納米囊的粒徑、多分

2、散系數(shù)（PDI）、Zeta電位、包封率和載藥量作為考察指標(biāo)，優(yōu)化篩選制備處方。當(dāng)OVA濃度為25 mg/mL，PLA濃度為12.5 mg/mL，內(nèi)水相和油相體積比為0.15:1，油相和外水相體積比為1:3，乳化劑濃度為1.5％時(shí)，制備的納米囊粒徑為220.5±2.3 nm，PDI是0.015±0.005，Zeta電位-20.4±0.6 mV，包封率36.23±3.78％。用魚精蛋白與PLA納米囊共攪拌得到魚精蛋白包覆的PLA納米囊，其粒

3、徑243.7±3.1 nm，PDI是0.130±0.003，Zeta電位19.0±0.9 mV，魚精蛋白包覆后其Zeta電位發(fā)生由負(fù)到正的變化。在透射電鏡觀察時(shí)，各納米囊形態(tài)規(guī)整，具有典型核-殼結(jié)構(gòu)。
　?。?）培養(yǎng)原代樹突狀細(xì)胞，純度為85-90％，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了重要保障。本研究考察了納米囊對(duì)樹突狀細(xì)胞表面分子（CD80、CD83、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ）表達(dá)的影響，我們發(fā)現(xiàn)OVA/PLA/PS納米囊可以顯著增強(qiáng)除了CD

4、80以外的樹突狀細(xì)胞表面分子的表達(dá)，OVA/PLA納米囊可以顯著增強(qiáng)CD86的表達(dá)。同時(shí)考察了各種納米囊對(duì)樹突狀細(xì)胞分泌IL-12p70的影響，發(fā)現(xiàn)OVA/PLA/PS可以顯著增加樹突狀細(xì)胞分泌IL-12p70，而OVA/PLA則無明顯影響。
　　（3）本文制備了異硫氰酸熒光素-OVA/PLA納米囊和異硫氰酸熒光素-OVA/PLA/PS納米囊。通過流式細(xì)胞術(shù)研究了樹突狀細(xì)胞對(duì)載異硫氰酸熒光素-OVA的納米囊的攝取情況。實(shí)驗(yàn)表明在3