溫敏性凝膠與海藻糖輔助變性溶菌酶復性的研究.pdf

1、本文研究了聚N-異丙基丙烯酰胺凝膠(PNIPAAm)和海藻糖促進變性-還原溶菌酶的復性作用。首先研究了凝膠制備的最佳條件和凝膠的物理性質(zhì)，在確定最適用的凝膠后，考察了各種因素條件下(制膠溫度、酶濃度和逐漸升溫)凝膠對復性收率的影響；其次，對不同的復性條件下(溫度、pH值和鹽濃度)海藻糖對溶菌酶的復性作用進行了研究。運用相關(guān)動力學模型，對不同濃度的海藻糖和鹽酸胍輔助溶菌酶復性的動力學過程進行了深入分析，探討了海藻糖促進溶菌酶復性的機理。

2、 結(jié)果表明，以總單體濃度(T)為10％，交聯(lián)度(C)為5％，制膠溫度為22℃制備的PNIPAAm具有最佳的溶脹倍率和縮水倍率，并具有良好的溫敏性能。實驗選用的PNIPAAm在4℃下溶脹倍率可達16倍以上，而在37℃條件下縮水48h后溶脹倍率僅為0.69倍，且具有良好的溶脹與收縮重復性。 利用PNIPAAm的溫敏吸放特性，完成對變性酶液在復性過程中的逐漸釋放、逐漸折疊，從而達到類似流加操作的復性效果，可有效提高最終復性收率。

3、 海藻糖具有促進變性溶菌酶復性的作用；存在最佳的添加濃度使復性收率最高；其最佳操作條件為：pH8-8.5，復性溫度35-37℃。利用三級表觀動力學方程擬合了不同濃度海藻糖和鹽酸胍輔助溶菌酶復性的動力學過程。分析表明，添加海藻糖后可使聚集體生成速率常數(shù)KA明顯減小，但對復性速率常數(shù)KN影響不大；在一定鹽酸胍濃度下，隨海藻糖濃度的增大，KA先降低后升高，在最佳濃度時KA出現(xiàn)最小值，由于此時KN/KA出現(xiàn)最大值，因此復性收率r最大；在