茶黃素測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)的建立以及茶黃棓靈類(lèi)化合物的酶促合成.pdf

1、茶黃素是一類(lèi)具有苯并卓酚酮結(jié)構(gòu)的色素化合物，對(duì)構(gòu)成紅茶―紅湯紅葉的品質(zhì)特征有重要作用。近年來(lái)，眾多的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明茶黃素具有抗氧化、抗癌等生物學(xué)活性，茶黃素的應(yīng)用基礎(chǔ)研究受到了廣泛的關(guān)注。本試驗(yàn)主要研究?jī)?nèi)容和研究結(jié)果如下：
　　茶黃素定量分析標(biāo)準(zhǔn)的建立。運(yùn)用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法對(duì)紅茶和茶制品中主要的4種茶黃素進(jìn)行檢測(cè)方法研究，制定農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。該方

2、法采用反相C18柱進(jìn)行梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，以茶黃素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時(shí)間定性，面積外標(biāo)法定量。此法所采用的標(biāo)準(zhǔn)曲線（0.1μg/mL~40μg/mL）具有良好的線性關(guān)系（R2>0.9999），檢測(cè)限為0.04μg/mL，各組分的加標(biāo)回收率為90.03％~105.05%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。3家實(shí)驗(yàn)室對(duì)此檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證，均證明了此方法的可行性及可靠性。本方法可簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)紅茶、速溶紅茶及冰紅茶中主要的4種茶黃素。

3、r>　　微孔濾膜的使用對(duì)茶黃素類(lèi)和兒茶素類(lèi)等成分分析的影響。在上述茶黃素檢測(cè)方法的建立構(gòu)成中，筆者著重研究了微孔濾膜在HPLC定量分析紅茶及紅茶制品中茶黃素類(lèi)和兒茶素類(lèi)等成分的影響。試驗(yàn)選擇了2種孔徑5個(gè)廠家生產(chǎn)的6種不同材質(zhì)的微孔濾膜，對(duì)紅茶及紅茶提取物中的茶黃素類(lèi)、兒茶素類(lèi)、咖啡堿的吸附作用進(jìn)行研究。結(jié)果表明，尼龍濾膜對(duì)10μg/mL茶黃素(theaflavin，TF)標(biāo)品幾乎完全吸附，其回收率低于1%，而親水型聚四氟乙烯（poly

4、tetrafluoroethylene，PTFE）和聚偏氟乙烯（poly vinylidene fluoride，PVDF）濾膜在TF標(biāo)品中回收率能達(dá)到97%以上；另外，不同廠家的濾膜性能差異顯著，以醋酸纖維濾膜為例，廠家1和廠家3生產(chǎn)的同種濾膜對(duì)TF標(biāo)品的回收率分別為11.86%和99.95%。結(jié)果表明，微孔濾膜的使用是影響茶黃素和兒茶素等成分準(zhǔn)確測(cè)定的關(guān)鍵前處理步驟。
　　酶促合成茶黃素。論文研究了乙醇/水介質(zhì)中辣根過(guò)氧化物酶

5、（horseradish peroxidase，HRP）酶促合成茶黃棓靈-3-沒(méi)食子酸酯的方法。系統(tǒng)研究了反應(yīng)體系的pH值、過(guò)氧化氫（H2O2）量、反應(yīng)溫度以及底物配比等因素對(duì)酶促反應(yīng)的影響；實(shí)驗(yàn)運(yùn)用LC-MS對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征與分析，證明得到了茶黃棓靈-3-沒(méi)食子酸酯；通過(guò)乙醇/水介質(zhì)顯著提高了酶促合成茶黃棓靈-3-沒(méi)食子酸酯的合成產(chǎn)率，優(yōu)于單一水溶劑的環(huán)境。
　　論文研究了單寧酶和過(guò)氧化物酶先后作用表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(

6、epigallocatechin-3-gallate，EGCG)一鍋合成茶黃棓靈的方法。此方法以EGCG為起始原料，經(jīng)單寧酶水解作用后加入HRP氧化縮合，兩步一鍋合成茶黃棓靈。本文并嘗試了先利用HRP將EGCG與連苯三酚反應(yīng)合成茶黃棓靈-3-沒(méi)食子酸酯后再經(jīng)單寧酶水解，亦可形成茶黃棓靈。論文并進(jìn)一步考察了單寧酶水解EGCG制備茶黃棓靈前體物質(zhì)表沒(méi)食子兒茶素（epi-gallocatechin，EGC）和沒(méi)食子酸（gallic acid，