EGDE交聯(lián)血紅蛋白制備紅細胞代用品.pdf

1、研究將乙二醇二縮水甘油醚(EGDE)作為蛋白質(zhì)交聯(lián)劑,用來交聯(lián)血紅蛋白(Hb),制備紅細胞代用品.探索了這一交聯(lián)反應的可行性,優(yōu)化了交聯(lián)條件.該文還發(fā)展了一種活性基團干擾法,間接測定出EGDE在pH7.5下,主要作用基團為血紅蛋白的巰基,在pH8.7和9.5的條件下,主要作用基團為血紅蛋白的氨基.采用SDS-PAGE電泳、高效液相色譜和多角度激光散射聯(lián)用法檢測交聯(lián)反應結(jié)果.實驗表明,不同的反應條件下可得到不同的反應產(chǎn)物,在35℃、pH8

2、.7、較低的血紅蛋白濃度(20mg/ml)和相對較高的修飾劑比例(摩爾比EGDE:Hb=100:1)下反應4小時,主要產(chǎn)物為分子內(nèi)部亞基之間交聯(lián)的血紅蛋白,且分子內(nèi)交聯(lián)血紅蛋白相對總蛋白含量90％以上;在pH7.5、較高的血紅蛋白濃度(200mg/ml)和相對較低的修飾劑比例(摩爾比EGDE:Hb=25:1)下反應12小時,主要產(chǎn)物為分子間交聯(lián)寡聚血紅蛋白,分子量范圍在140-380KD之間,其中二聚體血紅蛋白占總蛋白量的74.7％,三