麻紡韌皮纖維脫膠用堿性果膠酶的制備及表征.pdf

1、東華大學碩士學位論文麻紡韌皮纖維脫膠用堿性果膠酶的制備及表征姓名：李力炯申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：張興群201201東華大學碩士學位論文麻紡韌皮纖維脫膠用堿性果膠酶的制各及表征1、從中國湖南腐爛苧麻上篩選得到的召口cfZ脅s“6療凰A5是一種能產生具有脫膠活性的堿性果膠酶的微生物。其發(fā)酵液經硫酸銨鹽析分級沉淀、透析、離子交換層析、交聯(lián)葡聚糖凝膠層析純化，得到分子量約為45kDa的堿性果膠酶。比酶活為52844

2、3U／『mg，整個純化過程酶活回收率為424％，純化倍數為605倍。酶最適反應溫度為50℃，最適pH為96，較能夠耐受高溫和堿性環(huán)境。Ca2對其有一定的激活作用。C02，Ba2和EDTA對其有強的抑制作用。2、根據GenBank上召以cf2If淞s曲ff凰編碼堿性果膠酶(pectatelyase)的基因0PD序列，設計合成一對引物，以曰口cf‰蹦施拯A5基因組DNA為模板，利用PCR技術擴增得到1260bp的研叭片段。序列測定表明，B口

3、cf‰J糾6巧加A5的pgJ『基因序列與Ge出ank：X748801序列相比存在9處堿基差異，同源性為993％，氨基酸序列同源性為995％。曰acf刀淞J“6ff凰A5的pgJ『氨基酸序列與文獻中所報道的p已，活性位點(鈣離子結合位點)以及鄰近鈣離子的保守氨基酸均為一致。將PCR擴增獲得的pe，片段通過T載體連接，構建克隆質粒pMD節(jié)講，轉化大腸桿菌DH50【，獲得重組轉化子。雙酶切克隆質粒pMD節(jié)P『，得到具有勛Ⅱ和舶紅酶切位點的粘性