木聚糖酶XynⅢ的N-端融合纖維結(jié)合結(jié)構(gòu)域CBD1-CBD2的研究.pdf

1、木聚糖酶能夠降解木聚糖形成木寡糖或木糖，在造紙、飼料、食品、能源以及工農(nóng)業(yè)等有著廣泛的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)室選用的親本菌株黑曲霉A-25所分泌的β-1，4-內(nèi)切木聚糖酶XynⅢ其最適溫度為46℃、最適pH為3.8，對(duì)于在高溫高堿的極端生物工程環(huán)境下使用非常不利。前期成功獲得成熟的XynⅢ-CBD、XynⅢ-CBDl和XynⅢ-CBD2，其中XynⅢ-CBD的最適溫度提高了2℃，XynⅢ-CBD1的pH提高了0.4個(gè)單位，XynⅢ-CBD2在

2、54℃保溫30min后相對(duì)酶活提高了近一倍。然而這些都是將結(jié)構(gòu)域融合在木聚糖酶的C端的研究。
　　 本研究通過融合PCR技術(shù)，將來源于極端嗜熱菌海棲熱袍菌XynA的纖維素結(jié)合結(jié)構(gòu)域CBD1和CBD2基因通過融合PCR分別融合到木聚糖酶XynⅢ基因的N端，連接在克隆載體pMD18-T并轉(zhuǎn)化Jm109，挑選陽性轉(zhuǎn)化子提取質(zhì)粒酶切連接pET20b表達(dá)載體，并在大腸桿菌BL21(DE3)中高效表達(dá)，最后對(duì)重組酶的粗酶進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)分析。

3、
　　 本課題成功獲得重組蛋白CBD1-XynⅢ和連接了片段CBD2的Linker-XynⅢ，其中cBD1-XynⅢ相比野生型最適pH提高了0.2個(gè)單位，并且在2.6到4.4之間活性保持在60％以上，說明CBD1-XynⅢ比Linker-XynⅢ和XynⅢ更適合在酸性環(huán)境下保存；
　　 Linker-XynⅢ相比野生型半滅活時(shí)間降低了9min，CBD1-XynⅢ降低的更多。盡管只是連接了片段的CBD2，卻在一定程度上抵消