驢油性質(zhì)及酶法定向酯交換制備功能性油脂的研究.pdf

1、中國是世界上最大的家驢養(yǎng)殖國，有四千多年的養(yǎng)驢歷史。驢油在我國華北地區(qū)是較常見的食用動物油脂。但是目前，國內(nèi)外對驢油的基礎(chǔ)研究和功能性研究尚處于空白。
　　本研究首先采用氣相色譜儀和薄層色譜儀對驢油的總脂肪酸、sn-2位脂肪酸、反式脂肪酸的組成及含量進行了分析，利用高效液相色譜儀對驢油所含的生育酚和膽固醇進行定量分析，利用牛津核磁振動儀測定了不同溫度下驢油的固體脂肪含量，對驢油基礎(chǔ)物理化學性質(zhì)中的酸價、碘價、皂化價、過氧化值、折光

2、指數(shù)和相對密度進行了測定。經(jīng)實驗測得：驢油總脂肪酸中不飽和脂肪酸59.30％，含量最高的是油酸為36.28%。驢油反式脂肪酸含量0.206%。驢油中生育酚總含量85.9mg/kg，以α-生育酚含量為最高。驢油膽固醇含量甚微（0.03187mg/kg)，驢油的完全融化溫度39-40℃。
　　為比較驢油與其他動物油成分的差異，本研究將驢油與豬油、牛油、羊油、雞油、鴨油、鴕鳥油的理化性質(zhì)和脂肪酸組成及微量元素的含量進行了比較，得出結(jié)論:

3、在所研究的家畜動物油中，驢油脂肪酸中的不飽和脂肪酸含量最高，多不飽和脂肪酸的總量高過研究中所測的家畜動物油脂，接近家禽動物油。驢油中sn-2位鍵的不飽和脂肪酸含量同樣高過所測的家畜動物油脂，并且主要高在人體必需脂肪酸上。驢油的反式脂肪酸在所測試動物油中含量最低，并且驢油的膽固醇在所測動物油中含量最低。驢油的生育酚在所測試的動物油中含量最高。
　　在驢油研究的基礎(chǔ)上，本課題著重研究了以驢油為基料的功能性油脂的制備方法，建立了無水無溶

4、劑環(huán)境脂肪酶對底物的分解與合成在同一體系同步定向制備功能性油脂的研究模型。用驢油做底物，將驢油與共軛亞油酸（CLA）用三維運動恒速常壓法提高酯交換率。實驗首先尋找并篩選特異性脂肪酶，而后確定單因素反應(yīng)條件，利用響應(yīng)曲面分析方法對酶法定向酯交換反應(yīng)條件進行優(yōu)化，最終確定了最佳反應(yīng)條件：用脂肪酶 novozymes435作生物催化劑，酯交換的反應(yīng)溫度60℃，底物比為1:3（驢油：共軛亞油酸w/w），加酶量為7%（與驢油質(zhì)量比），反應(yīng)時間55

5、h，實驗得到的共軛亞油酸驢油甘油三酯得率為47%。
　　討論了酶法定向酯交換的反應(yīng)機理，反應(yīng)中的酸解反應(yīng)、酸脂交換、酯-酯交換的中間過渡態(tài)復(fù)合結(jié)構(gòu)、分子內(nèi)反應(yīng)機理，以及脂肪酶的活性中心和反應(yīng)機理的協(xié)同因素。敘述了無溶劑狀態(tài)下酸解、酸酯同時交換、抑制分子間酯-酯交換的反應(yīng)機理。將復(fù)雜反應(yīng)在無溶劑條件下同一體同時完成，為混合物的分離純化創(chuàng)造了條件。
　　采用二級分子蒸餾法使用轉(zhuǎn)子薄膜分子蒸餾器純化分離了酶法定向酯交換后生成的功能

6、性甘油三酯的成分，確定出分子蒸餾除去脂肪酸的最佳條件是：一級分子蒸餾的參數(shù)為：系統(tǒng)真空度2.0 Pa，蒸餾溫度230℃，進料流量2.0mL/min，刮膜轉(zhuǎn)速150rpm。二級分子蒸餾的參數(shù)為：系統(tǒng)真空度0.2 Pa，蒸餾溫度310℃，進料流量1.5mL/min，刮膜轉(zhuǎn)速350rpm。
　　為了驗證產(chǎn)品的食用安全性，本研究對制備的共軛亞油酸驢油甘油三酯產(chǎn)品進行了食品安全性毒理學評價。實驗方法按照國家標準《食品安全性毒理學評價程序》的

7、規(guī)定，采用大鼠、小鼠對所制備的產(chǎn)品進行急性經(jīng)口實驗、遺傳毒理實驗（包括 Ames實驗、骨髓微核實驗、精子畸形實驗）和30天喂養(yǎng)實驗。經(jīng)檢測，重組的共軛亞油酸驢油甘油三酯是無毒、無遺傳突變的安全性食用級油脂。
　　采用 LNCaP人體前列腺淋巴結(jié)癌細胞系對重組 CLA驢油進行了增殖抑制作用驗證。以具有抗癌功能的CLA標準樣品（99.95%純度）為陽性對照，無抗癌功能的驢油為陰性對照，對實驗制備出的CLA含量為47%的功能油脂進行對L