嗜熱鏈球菌抗噬菌體菌株的選育、培養(yǎng)及凍干發(fā)酵劑的研究.pdf

1、本研究以酸奶生產(chǎn)菌株嗜熱鏈球菌S2為出發(fā)菌株，采用自然選育的方法篩選出其抗噬菌體突變株。獲得4株生產(chǎn)性能較好的抗噬菌株KS21、KS22、KS23、KS24，溶源性檢測其為非溶源菌。對4株抗性菌株進(jìn)行20次傳代和酸奶發(fā)酵試驗(yàn)，結(jié)果表明抗性穩(wěn)定，其中KS23發(fā)酵酸奶產(chǎn)酸達(dá)109°T，凝乳時間與出發(fā)菌株相當(dāng)。細(xì)胞全蛋白SDS-PAGE電泳分析顯示突變菌株與出發(fā)菌株在某些蛋白表達(dá)上有所差異，可能是抗性產(chǎn)生的原因。
　　 通過單因素實(shí)驗(yàn)

2、篩選出最適碳、氮源分別為葡萄糖、大豆蛋白胨、胰蛋白胨。找到對菌體生長有促進(jìn)作用的增菌汁番茄汁、玉米汁、啤酒汁，營養(yǎng)因子和鹽類。在此基礎(chǔ)上，利用Plackett-Burman設(shè)計(jì)確定對嗜熱鏈球菌生長影響最大的三個因素，分別為大豆蛋白胨、玉米汁、醋酸鈉。利用最陡爬坡實(shí)驗(yàn)逼近較高區(qū)域，通過Box-Behnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)找到最佳的培養(yǎng)基。其成分如下：葡萄糖1.5％、大豆蛋白胨4.5％、胰胨2％、酵母粉0.5％、牛肉膏1％、磷酸氫二鉀0.5％、玉

3、米汁40％、醋酸鈉0.3％，pH為6.8。在上述培養(yǎng)基中發(fā)酵后活菌數(shù)達(dá)到11.6×108cfu/mL。
　　 利用3L全自動發(fā)酵罐，對恒定發(fā)酵pH所添加的堿種類的選擇和補(bǔ)料液物質(zhì)的選擇進(jìn)行研究。結(jié)果表明，以3％的接種量，利用25％Na2CO3溶液恒定pH為6.0，在發(fā)酵開始2h后補(bǔ)充200mL10％乳糖和20％酵母粉混合液，發(fā)酵12h后活菌數(shù)達(dá)到了1.01×1010cfu/mL。
　　 從發(fā)酵培養(yǎng)基的類型，培養(yǎng)溫度，預(yù)培