用蛋白質印跡聚合物研究蛋白質間的相互作用及天然BiP氮端序列.pdf

1、本論文分為兩個部分:第一部分是帶有吡啶識別基團的蛋白質印跡聚合物的制備及蛋白質印跡聚合物作為抗體取代物對蛋白質(BiP與FKBP23)之間相互作用的研究，第二部分是兩步法分離純化天然微量高分子量蛋白質BiP及BiP氮端序列的研究。
　　研究蛋白質相互作用的主要方法是免疫共沉淀法，需要先針對目標蛋白制備出多克隆或單克隆抗體，過程相對復雜并且目的蛋白只有達到一定濃度才能與抗體結合形成沉淀，因而此方法只適用于研究高表達量的目標蛋白，在應

2、用上具有局限性。
　　第一部分工作中我們合成了一種含有隨機分布的吡啶識別基團及雙鍵錨定基團的輔助識別聚合物鏈(mARPCs)，并以其為輔助單體，以雙鍵修飾的聚乙烯醇大孔樹脂微球為載體，以克隆蛋白質鼠BiP(mBiP)或豬FKBP23(pFKBP23)為模板分別制備了兩種蛋白質印跡聚合物mPIPBiP及mPIPFKBP23。分別使用mPIPBiP和mPIPFKBP23對豬肝內質網體提取物進行吸附，通過銀染及western-blot在

3、洗脫液中同時檢測到BiP和FKBP23。證明了在內質網體中BiP與FKBP23是特異性結合的。當緩沖液中[Ca2+]調節(jié)到4mmol時，在洗脫液中只檢測到了BiP而沒有FKBP23或只檢測到了FKBP23而沒有BiP，說明當[Ca2+]為4mmol，BiP與FKBP23不結合，BiP與FKBP23之間的結合受[Ca2+]調控。這與使用生物抗體的免疫共沉淀方法得到的結果相一致。由此說明蛋白質印跡聚合物可以作為抗體取代物來研究蛋白質間的相互

4、作用，為今后研究蛋白質相互作用提供了一種新方法。
　　有研究表明，BiP是內質網體中的Hsp70家族的成員，在進入內質網體的分泌型蛋白質和膜蛋白的折疊、貯存和轉運方面發(fā)揮著重大的作用。本論文的第二部分工作是以豬BiP蛋白為研究對象，用以克隆的mBiP為模板制各的兩種蛋白質印跡聚合物分別對豬內質網體提取物中的BiP進行分離純化。通過對洗脫液進行對比，我們發(fā)現(xiàn)兩種蛋白質印跡聚合物所吸附的非特異性蛋白質有所不同，因此我們通過兩種蛋白質印