2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、他汀類藥物廣泛用于高血脂癥的治療,其手性中間體的傳統(tǒng)合成工藝復(fù)雜,成本較高。2-脫氧-D-核糖-5-磷酸醛縮酶(DERA)能催化乙醛和氯乙醛進(jìn)行縮合反應(yīng),直接生成具有兩個(gè)手性中心的他汀類藥物手性中間體(4R,6S)-2,4-二羥基-6-氯甲基毗喃,為此DERA成為了當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。已報(bào)道的大腸桿菌DERA和其突變體催化活性不高、抗底物變性能力不強(qiáng),考慮到嗜熱菌Pyrobaculumaerophilum DERA高熱穩(wěn)定性,本研究對(duì)嗜熱菌

2、Pyrobaculum aerophilum的DERA進(jìn)行定向進(jìn)化,以獲得高催化活性和高抗底物變性能力的生物催化劑,旨在改進(jìn)他汀類藥物手性中間體的生物催化合成工藝,以提高合成效率,降低成本,簡(jiǎn)化合成步驟,獲得更高的純度。
  以Pyrobaculum aerophilum的DERA作為親本,然后建立易錯(cuò)PCR文庫(kù),通過(guò)建立一套快速篩選的方法,從文庫(kù)中篩選出了具有高催化活性和抗底物變性的DERAPya(I174V,187I)。

3、>  對(duì)篩選出來(lái)的DERAPya(I174V,V187I)工程表達(dá)菌株進(jìn)行高密度發(fā)酵,對(duì)發(fā)酵條件經(jīng)行優(yōu)化,獲得最佳發(fā)酵條件為:誘導(dǎo)時(shí)機(jī)為OD600=0.68、誘導(dǎo)劑IPTG終濃度為1mM、 pH為7、溫度為30℃、誘導(dǎo)時(shí)間為12h。
  用發(fā)酵產(chǎn)生的DERAPya(I174V,V187I)催化乙醛和氯乙醛反應(yīng),并對(duì)其催化條件進(jìn)行優(yōu)化,獲得最佳酶催化條件:緩沖體系為咪唑-磷酸體系,反應(yīng)pH為6,反應(yīng)溫度為25℃。
  為解決傳

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