伯克霍爾德桿菌表面多糖抗原重復(fù)片段及其寡聚體的合成研究.pdf

1、糖類作為微生物、動(dòng)植物及人體細(xì)胞表面的重要組成部分，在生命體的生長(zhǎng)、發(fā)育和代謝等過程中發(fā)揮著極其重要的作用。細(xì)菌細(xì)胞表面存在許多結(jié)構(gòu)特異的莢膜多糖和脂多糖，是重要的細(xì)菌毒力因子，對(duì)細(xì)菌的毒性起到了決定性作用。其結(jié)構(gòu)復(fù)雜多樣且高度保守，因此，糖類可以作為一種有效的抗原類化合物。
　　伯克霍爾德菌屬由60多個(gè)菌種構(gòu)成，可以從河水、土壤、淡水沉積物、植物根圍等多種生態(tài)環(huán)境中分離得到，同時(shí)也可以從人體和動(dòng)植物病原體中得到。在伯克霍爾德菌屬

2、中，毒性極強(qiáng)的植物、動(dòng)物及人體的致病菌包括洋蔥伯克霍爾德復(fù)合體(Bcc，Burkholderia cepacia complex)、類鼻疽（B.pseudomallei）及鼻疽（B.mallei）伯克霍爾德桿菌等等。研究發(fā)現(xiàn)，洋蔥伯克霍爾德菌作為一種人體致病菌，會(huì)引起細(xì)胞囊性纖維病人的嚴(yán)重肺部感染及急性、臨床不可控的“洋蔥綜合癥”，例如壞死性肺炎和敗血癥，且均有較高死亡率;而類鼻疽及鼻疽伯克霍爾德桿菌可引起類鼻疽病及鼻疽病。其中類鼻疽病

3、很難被診斷出來，臨床表現(xiàn)差異很大，基本表現(xiàn)為類似流感癥狀，良性的急性和慢性肺炎，爆發(fā)性敗血癥等。
　　經(jīng)大量研究證實(shí)，細(xì)菌莢膜多糖和脂多糖可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)。但不幸的是，多糖疫苗并不能引起T細(xì)胞依賴型的免疫記憶，同時(shí)嬰幼兒、老年人和免疫缺陷的病人對(duì)特定結(jié)構(gòu)的多糖抗原應(yīng)答反應(yīng)極弱。鑒于多糖疫苗的缺陷，新型多糖-蛋白疫苗逐漸進(jìn)入人們的視線。研究證實(shí)，多糖-蛋白疫苗可以誘導(dǎo)產(chǎn)生T細(xì)胞免疫記憶，使得基于莢膜多糖和脂多糖的新型

4、糖綴合物疫苗的發(fā)展成為可能。目前，已有多種多糖疫苗和新型多糖-蛋白疫苗上市,并在臨床上得到大量使用。
　　通過化學(xué)合成的方法可以制備結(jié)構(gòu)明確的伯克霍爾德桿菌多糖抗原重復(fù)片段及其寡聚體，與載體蛋白連接后得到半合成的糖結(jié)合疫苗，克服了天然多糖結(jié)構(gòu)的微觀不均一、結(jié)構(gòu)不明確且易于引入污染物等問題。合成寡糖-蛋白新型疫苗可以成為對(duì)抗傳染性細(xì)菌的有效武器。
　　依據(jù)上述思路，本論文主要針對(duì)洋蔥伯克霍爾德菌多糖重復(fù)片段及其二聚體進(jìn)行研究，

5、合成獲得的寡聚糖接下來可以用于研究相關(guān)糖抗原的結(jié)構(gòu)與活性之間的關(guān)系和疫苗的研發(fā)。本論文主要包含以下兩個(gè)章節(jié)的內(nèi)容:
　　第一章簡(jiǎn)要介紹了細(xì)菌表面的莢膜多糖與脂多糖的種類、結(jié)構(gòu)、功能、疫苗的研發(fā)歷史和研究現(xiàn)狀、多糖疫苗和糖結(jié)合疫苗的發(fā)展現(xiàn)狀和伯克霍爾德菌屬的種類、致病性和傳染性等。
　　第二章介紹了洋蔥伯克霍爾德菌多糖重復(fù)寡糖片段的全合成。通過逆合成分析設(shè)計(jì)了兩條路線，最終以D-半乳糖和兩個(gè)L-鼠李糖為原料完成了洋蔥伯克霍爾德

6、菌O-抗原三糖重復(fù)單元及其二聚體的化學(xué)合成。第一條路線擬采用引入大體積保護(hù)基從而促進(jìn)順式糖苷鍵的形成，但并沒有得到預(yù)期的結(jié)果。第二條路線主要是通過溶劑參與的方式，順利獲得了順式結(jié)構(gòu)的重要二糖中間體，再分別通過‘1+2’和‘2+2+2’的合成策略，借助三氯乙酰亞胺酯糖基、硫苷作為供體的糖基化反應(yīng)方法,9和34;其次，將單糖模塊進(jìn)行糖基化組裝制備二糖4,32和33;接著以化合物32為二糖供體和化合物39為二糖受體在N-碘代丁二酰亞胺和三氟甲