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文檔簡介
1、阿爾茨海默癥(Alzheimer Disease,AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,又名老年癡呆。它的病理學(xué)特征分別是淀粉樣蛋白斑和神經(jīng)纖維結(jié)。近些年來,隨著β-淀粉樣蛋白質(zhì)(β-amyloid,Aβ)假說的不斷更新,越來越多的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明淀粉樣蛋白質(zhì)沉積只是AD致病的結(jié)果而不是導(dǎo)致其致病的關(guān)鍵因素,其寡聚體形式的淀粉樣蛋白才是致病的罪魁禍?zhǔn)住?br> 為了從分子水平更深層次地理解淀粉樣蛋白質(zhì)錯(cuò)誤折疊和聚集的分子機(jī)制,解析淀粉樣蛋白
2、質(zhì)寡聚體的分子結(jié)構(gòu)迫在眉睫。固體核磁共振技術(shù)是研究這類體系最有力的工具。但是,固體核磁共振技術(shù)解析蛋白結(jié)構(gòu)對(duì)樣品要求較高,需要大量的、均一性較好的樣品。因此在體外制備符合其要求的寡聚體樣品尤為重要。
本論文主要研究內(nèi)容包括以下三個(gè)部分:
?。?)Aβ1-40蛋白的獲取
運(yùn)用分子克隆、蛋白表達(dá)純化技術(shù)在大腸桿菌細(xì)胞中成功制備出高含量、高純度的Aβ1-40蛋白。
?。?)Aβ1-40寡聚體樣品的制備、表征
3、
在溶液環(huán)境中采用低溫低鹽以及添加抑制劑、金屬離子等幾個(gè)方面制備Aβ1-40蛋白的寡聚體,并結(jié)合電泳、ThT熒光光譜、ANS熒光光譜、圓二色光譜和透射電子顯微鏡技術(shù)等對(duì)寡聚體進(jìn)行初步表征。發(fā)現(xiàn)Aβ1-40寡聚體呈圓餅狀,直徑為15nm-35nm左右。
?。?)抑制劑、金屬離子對(duì)Aβ1-40蛋白聚集機(jī)制的研究
在課題2的基礎(chǔ)上,通過液體核磁共振技術(shù),研究了抑制劑、金屬離子與Aβ1-40蛋白相互作用的分子機(jī)制,進(jìn)
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