重組苛求芽孢桿菌尿酸酶診斷性能評估.pdf

1、用尿酸酶法測定血清中尿酸水平可分為間接尿酸酶法和直接尿酸酶法,間接尿酸酶法中,用尿酸酶偶聯(lián)上醛脫氫酶和過氧化物酶的動力學(xué)方法效率高,缺點是成本高,干擾因素較多,使其很難在臨床上應(yīng)用推廣。目前的直接尿酸酶法只有終點平衡法,受0.40 mmol/L以上血清黃嘌呤等少數(shù)物質(zhì)干擾,對大多數(shù)其余血清成分有抗性,曾是IFCC推薦的參考方法。用過氧化物酶偶聯(lián)尿酸酶再加上不同的顯色劑稱為間接終點平衡法,則因為重復(fù)性好,操作簡便,節(jié)約成本等特點在臨床上得

2、到了廣泛地應(yīng)用,但最大的干擾因素來自于血清中的黃嘌呤。
　　我們已克隆了苛求芽孢桿菌胞內(nèi)尿酸酶基因并已申請其發(fā)明專利(專利受理號200910103741.1),此酶用于直接動力學(xué)法尿酸測定時可對1.50 mmol/L黃嘌呤有抗性。本課題的研究目的是考察此尿酸酶在間接終點平衡法應(yīng)用中的最適條件,對其診斷性能進(jìn)行詳細(xì)地評價,建立尿酸試劑盒的初步模型。
　　優(yōu)化后的試劑最適條件如下:
　　R1兩份(PBS6.0) R2一份(

3、PH9.2硼砂) HRP2.7U/ml(1.8U/ml) uricase1.2U/ml(0.4U/ml)4-AAP0.45mmol/L(0.3mmol/L) Toos4.2mmol/L(1.4mmol/L) NaN30.05％NaN30.05%
　　按照NCCLS的相關(guān)要求,對自主研制的尿酸試劑的各個診斷性能進(jìn)行了詳細(xì)地評價:檢測限LOD=LOB+1.65SD=14.4umol/L;線性范圍:0-1600umol/L線性方程:Y=

4、0.0003X-0.0012, R2=0.9971;可報告范圍:14.4-3510umol/L;批內(nèi)精密度為2.2%和3.0%,批間精密度為4.0%和4.8%;試劑保存的穩(wěn)定性可達(dá)半年以上,參考區(qū)間:男206-426umol/L,女145-336umol/L;膽紅素濃度≤320umol/L,抗壞血酸濃度≤0.4mmol/L,血紅蛋白濃度≤4g/L時,對尿酸測定結(jié)果沒有明顯干擾;與中生北控尿酸試劑進(jìn)行方法學(xué)比較:直線方程y=0.9506X

5、-1.2647,R2=0.9956。
　　在抗黃嘌呤干擾方面:中生北控尿酸試劑盒、成都邁克尿酸試劑盒、新城生物尿酸試劑盒、自制尿酸試劑盒在黃嘌呤濃度為0-1.2mmol/L時測定結(jié)果都沒有明顯干擾。而真核尿酸試劑在黃嘌呤濃度>0.3mmol/L時,即對測定結(jié)果有明顯的負(fù)干擾。以上實驗證明實驗室自制原核表達(dá)的尿酸酶試劑比真核表達(dá)的尿酸酶在抗黃嘌呤方面有明顯的優(yōu)勢,其它性能指標(biāo)的評價也達(dá)到了市場同類產(chǎn)品的相同水平。為后續(xù)將此重組尿酸酶