益生芽孢桿菌的誘變選育及酶學(xué)特性.pdf

1、本文對(duì)益生菌株的篩選與鑒定、誘變選育、酶學(xué)特性及益生效果進(jìn)行了研究，得出主要結(jié)果如下： (1)依據(jù)酶活和胃腸耐受性，分別從土壤和健康雞腸道中分離純化得到纖維素酶產(chǎn)生菌B1和蛋白酶產(chǎn)生菌JC12。其中B1菌株的CMC酶活和FPA酶活分別達(dá)到0.256 U/mL和0.228 U/mL，且可以耐受pH1.5和0.3％的膽鹽濃度。結(jié)合B1菌株的生理生化特征和16S rDNA序列分析，鑒定其為蠟樣芽孢桿菌(Bacillus cereus)

2、。菌株JC12的蛋白酶活為519 U/mL，具有良好的胃腸耐受性。根據(jù)生理生化特征，鑒定JC12菌株也為蠟樣芽孢桿菌。 (2)利用微波一硫酸二乙酯復(fù)合誘變B1、JC12菌株，獲得突變株B1-1和JC128。B1-1菌株的CMC酶活達(dá)到0.373 U/mL，F(xiàn)PA酶活達(dá)到0.348 U/mL，分別較出發(fā)菌株提高了45.70％和52.63％。突變株JC128的蛋白酶活達(dá)到1207U/mL，較出發(fā)菌株提高了1.33倍。兩突變株均具有遺

3、傳穩(wěn)定性，胃腸耐受性均較強(qiáng)。 (3)B1-1菌株最佳產(chǎn)酶條件為20 g/L麥芽糖，2.5 g/L硫酸銨，pH5.0，37℃下培養(yǎng)36 h。JC128菌株產(chǎn)蛋白酶的最適發(fā)酵條件是：以6％麥芽糖作碳源，3％豆餅粉作氮源，發(fā)酵溫度37℃，起始pH7.0。該蛋白酶的最適作用溫度為65℃，最適pH為值7.0，具有良好的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性。1 mmol/L Fe2+可顯著提高JC128菌株的蛋白酶活。體外平板抑菌試驗(yàn)表明突變株B1-1和J

4、C128對(duì)金黃色葡萄球菌和致病性大腸桿菌的抑菌效果明顯。 (4) B1-1和JC128菌株經(jīng)小鼠毒性試驗(yàn)初步證實(shí)為安全菌株，對(duì)小鼠有不同的促生長(zhǎng)作用，且混合菌株能夠顯著提高小鼠的生長(zhǎng)性能。小鼠飼喂B1-1和JC128菌株14 d后，測(cè)定小鼠腸道內(nèi)酶活力大小，結(jié)果表明，B1-1菌株具有蛋白酶活性，JC128菌株具有纖維素酶活性，并且B1-1和JC128菌株混合飼喂的效果更好。與對(duì)照組相比，CMC酶活、FPA酶活和蛋白酶活分別提高了