禾長(zhǎng)蠕孢菌孢子生產(chǎn)及其制劑加工研究.pdf

1、禾長(zhǎng)蠕孢菌(Helminthosporium gramineum Rabenh.f.sp.echinochloae,簡(jiǎn)稱(chēng)HGE)是從廣西自然感病稗草上分離得到的雜草生防潛力菌。耿銳梅等用禾長(zhǎng)蠕孢菌孢子懸浮劑在田間進(jìn)行雜草防除試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)3.0×107孢子／m2懸浮劑對(duì)稗草防效可達(dá)到85.2％,對(duì)稻田中的其它常見(jiàn)雜草也有較強(qiáng)的致病作用并對(duì)水稻、小麥、玉米、棉花、油菜等主要作物安全。因此,禾長(zhǎng)蠕孢菌具有開(kāi)發(fā)成真菌除草劑的潛力,其孢子可作為真菌除

2、草劑的主要活性成分。然而,禾長(zhǎng)蠕孢菌在大規(guī)模生產(chǎn)中孢子產(chǎn)量較低,劑型加工技術(shù)困難,使其商品化受到限制。本研究對(duì)禾長(zhǎng)蠕孢菌固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,期望通過(guò)條件優(yōu)化將孢子產(chǎn)量提高到107孢子／克干物質(zhì)以上。放大發(fā)酵體系,保證孢子產(chǎn)量及質(zhì)量基本不變,為工業(yè)化生產(chǎn)打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。制劑研制過(guò)程中,綜合評(píng)價(jià)助劑的分散力、穩(wěn)定性、懸浮率以及與孢子的生物相容性,篩選出對(duì)禾長(zhǎng)蠕孢菌孢子無(wú)毒或毒性較小的助劑種類(lèi),并通過(guò)二次通用旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)優(yōu)化助劑

3、組合。期望通過(guò)劑型研究減少禾長(zhǎng)蠕孢菌孢子對(duì)結(jié)露期的依賴(lài),刺激孢子萌發(fā),提高毒力、擴(kuò)散能力及粘著力,避免紫外損傷等。劑型的成功研制決定了微生物除草劑的開(kāi)發(fā)、登記注冊(cè)和商品化。本文的研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　 禾長(zhǎng)蠕孢菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)孢培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件研究。以珍珠巖為底物基質(zhì),每100mL珍珠巖(大約7.1g)中添加4g米粉、1g豆粕粉、0.2g Na3PO4·12H2O、0.1g MgSO4,水分添加量為40mL,(培養(yǎng)基含水量約為7

4、6.5％),接入8mL,菌懸液,攪拌均勻,黑暗條件下28℃靜置培養(yǎng)14d,黑光燈12h循環(huán)光照,誘導(dǎo)產(chǎn)孢。孢子最高產(chǎn)量可達(dá)1.12×107孢子／克干物質(zhì)。
　　 禾長(zhǎng)蠕孢菌固態(tài)發(fā)酵擴(kuò)大培養(yǎng)研究。擴(kuò)大固態(tài)發(fā)酵體系,在大托盤(pán)上進(jìn)行禾長(zhǎng)蠕孢菌固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)孢試驗(yàn),培養(yǎng)基組成按上述結(jié)果等比例擴(kuò)大,培養(yǎng)條件采用優(yōu)化后的條件。試驗(yàn)結(jié)果表明,利用大托盤(pán)進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵的最高產(chǎn)孢量可以達(dá)到1.45×107孢子／克干物質(zhì)。隨后,用真菌孢子分離器收集培養(yǎng)物

5、中的孢子,并對(duì)所獲孢子粉進(jìn)行孢子質(zhì)量檢測(cè)。結(jié)果表明,孢子粉的含水量為7％～8％,孢子粉的含孢量為3.02×107孢子／克,孢子萌發(fā)率基本在99％以上,說(shuō)明擴(kuò)大培養(yǎng)所獲得的孢子質(zhì)量和孢子產(chǎn)量能夠達(dá)到標(biāo)準(zhǔn),可以作為劑型研究的原材料。
　　 禾長(zhǎng)蠕孢菌孢子制劑研究。研究發(fā)現(xiàn)珍珠巖粉末對(duì)菌絲體生長(zhǎng)沒(méi)有影響,孢子粉(g):珍珠巖粉末(g)的最佳混合比例為3:1。大豆油對(duì)菌絲體生長(zhǎng)沒(méi)有影響,按照孢子粉(g):大豆油(mL)為2:1比例混合后