沙蔥黃酮提取工藝優(yōu)化、結構鑒定及其相關生物活性研究.pdf

1、沙蔥廣泛生長于我國西北荒漠化草原且所含營養(yǎng)物質豐富，且所含有營養(yǎng)物質豐富，擁有其獨特的天然生物活性。而沙蔥黃酮作為其天然活性成分之一，目前與其相關的研究報道較少。為使沙蔥活性成分能夠得到全面的研究與開發(fā)，本研究旨在建立一套得率較高、活性較好的沙蔥黃酮提取工藝、并結合相關試驗確定其抗氧化、抗菌活性及對綿羊外周血淋巴細胞免疫功能的影響作用，為沙蔥有效成分的進一步研究和沙蔥相關保健產品及飼料添加劑的開發(fā)與利用提供依據。本試驗所得結果如下:

2、r>　　(1)在單因素試驗基礎上，采用響應面法對超聲波和酶解法提取沙蔥總黃酮的工藝進行優(yōu)化，得出超聲波法提取沙蔥總黃酮的最佳提取工藝參數為:提取時間15min，提取溫度40℃，乙醇濃度75％，料液比1∶30g/mL，此條件下沙蔥總黃酮得率為12.85±0.03mg/g。纖維素酶解法提取沙蔥總黃酮的最佳提取工藝參數為:0.1g脫脂脫色沙蔥粉末中添加4.5mg纖維素酶，溫度39℃，體系pH值為4.3，乙醇濃度為75％，料液比1∶50g/mL

3、，提取時間4h，此條件下沙蔥總黃酮得率為5.48±0.02mg/g。
　　(2)比較兩種方法提取所得沙蔥總黃酮的體外抗氧化、抗菌及對綿羊外周血淋巴細胞免疫功能的影響作用。結果顯示，沙蔥總黃酮具有一定的體外抗氧化活性，相同濃度條件下超聲法提取所得沙蔥總黃酮的總還原能力及體外清除DPPH有機自由基的能力強于酶解法提取所得沙蔥總黃酮，酶解法所得沙蔥總黃酮清除羥基自由基的能力高于超聲波提取法所得沙蔥總黃酮。沙蔥總黃酮對大腸桿菌、金黃色葡萄

4、球菌的抑制作用不敏感，對沙門氏菌的抑制作用為低度敏感，對綠膿桿菌沒有抑制作用，并且兩種提取方法所得沙蔥總黃酮的抑菌作用無明顯差別。兩種提取方法所得沙蔥總黃酮均能夠促進綿羊外周血淋巴細胞增殖，上調綿羊外周血淋巴細胞IL-2與IFN-γ基因的mRNA表達水平，下調IL-4基因mRNA的表達水平，且超聲法提取所得沙蔥總黃酮效果優(yōu)于酶解法提取所得沙蔥總黃酮。
　　(3)對超聲波提取所得沙蔥總黃酮使用聚酰胺柱層析進行梯度洗脫，分別得到蒸餾水

5、、35％、55％、75％乙醇洗脫組分，并分別對各組分進行紅外、紫外光譜檢測及液質聯用檢測。綜合三種檢測結果分析得出，蒸餾水洗脫成分含有大量的單糖，35％乙醇洗脫組分除含有單糖外可能含有3'，4'-環(huán)氧基-7-O-5-甲氧基黃酮醇與7-O-5，4'-二甲氧基-3'-羥基黃酮，55％乙醇洗脫組分中含有糖類、蘆丁、木犀草素-5'-O-葡萄糖-4-羥基苯丙酸、異槲皮苷。75％乙醇洗脫組分中含有糖類、金合歡素及黃酮類物質。
　　(4)對沙蔥

6、總黃酮不同洗脫組分的體外抗氧化、抗菌及對綿羊外周血淋巴細胞的免疫調節(jié)作用進行研究。結果顯示沙蔥總黃酮中35％乙醇洗脫組的抗氧化與免疫調節(jié)活性最強，其所含的3'，4'-環(huán)氧基-7-O-5-甲氧基黃酮醇與7-O-5，4'-二甲氧基-3'-羥基黃酮的活性結構是其抗氧化活性的關鍵基團，而其所含的C2=C3雙鍵結構是其調節(jié)免疫活性的關鍵結構組分。而在沙蔥總黃酮中起到抗菌活性的關鍵部位是55％乙醇洗脫組成分，這不僅與其結構組分中含有電荷密度較高的C