柚寄生總黃酮的提取工藝優(yōu)化及其

1、1柚寄生總黃酮的提取工藝優(yōu)化及其柚寄生總黃酮的提取工藝優(yōu)化及其體外抑制人肝癌細(xì)胞體外抑制人肝癌細(xì)胞Hep3B作用的初步評(píng)價(jià)作用的初步評(píng)價(jià)廖彭瑩，卓生華，邱志彬，蔡少芳（廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院廣西南寧530001）摘要摘要：目的：優(yōu)選柚寄生總黃酮的提取工藝，初步評(píng)價(jià)總黃酮體外抑制人肝癌細(xì)胞Hep3B的作用。方法：以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定柚寄生提取液的總黃酮含量，并以此為指標(biāo)采用正交試驗(yàn)法L9（34）優(yōu)選柚寄生總黃酮的提取工藝條件；采用MTT法測(cè)定

2、總黃酮對(duì)人肝癌細(xì)胞Hep3B的體外抑制作用。結(jié)果：乙醇濃度對(duì)總黃酮的提取率影響最大，其次是料液比、提取溫度、提取時(shí)間；體外抗腫瘤活性篩選結(jié)果顯示，在濃度為500gmL1gmL時(shí)，總黃酮對(duì)人肝癌細(xì)胞Hep3B作用后，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率存活率為48.6051.40%。結(jié)論：優(yōu)選出的柚寄生總黃酮提取工藝條件為乙醇濃度60℅，料液比1：30（gmL1gmL），提取溫度80℃，提取時(shí)間120min，連續(xù)提取2次；柚寄生總黃酮有一定的抑制人肝癌細(xì)

3、胞Hep3B的作用。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：柚寄生，總黃酮，提取工藝，抗腫瘤OptimizationofExtractionProcessthePreliminaryEvaluationoftheInhibityActivityonHep3BCancerCellofTotalFlavonoidsfromViscumovalifoliumDC.LiaoPengyingZhuoShenghuaQiuZhibinCaiShaofangGuangxiUn

4、iversityofChineseMedicineGuangxiNanningAbstractObjective:tooptimizetheextractionprocessoftotalflavonoidsfromViscumovalifoliumDC.toevaluatetheinhibityeffectoftotalflavonoidsonHep3Bcancercellinvitro.Method:thecontentoftota

5、lflavonoidswasanalyzedbyUVmethodusingrutinasthestardsubstancetheextractionprocessoftotalflavonoidswasoptimizedbythogonalexperiment(L9(34)).TheinhibityeffectofthetotalflavonoidsonHep3BcancercellinvitrowasmeasuredbyMTTmeth

6、od.Results:theconcentrationofethanolhadthegreatesteffectontheextractionratiooftotalflavonoidsthederoftheotherfactsthataffectedtheextractionprocesswas:theratioofsolidtoliquidtheextractiontemperaturetheextractiontime.Theim

7、pressiverateontheHep3Bcancercellwas51.40%afterbeingtreatedbytotalflavonoidsattheconcentrationof500gmL1.Conclusion:theoptimalextractionconditionswereasfollows:60%ofethanolconcentration1:30(gmL1)ofsolidtoliquidratio80Cofex

8、tractiontemperature120minofextractiontimeextracttwice.ThetotalflavonoidsshowedsomeinhibityeffectonHep3Bcancercellinvitro._______________________________________通訊作者：廖彭瑩，（1984–），女，講師，碩士。研究方向：天然藥物化學(xué)。Tel：07713137585，Email:g

9、xlpy@?；痦?xiàng)目：2012年度廣西高等學(xué)校立項(xiàng)科研項(xiàng)目（201204LX201)；廣西中醫(yī)學(xué)院校級(jí)普通課題（P2010062）3mL，即為對(duì)照品溶液，濃度為0.20mgmL1mg∕mL。精密稱量1g藥材，精密量取70%乙醇20mL，加熱回流提取約60min，提取1次，過(guò)濾，得樣品溶液。2.2波長(zhǎng)的選擇精密吸取對(duì)照品溶液10mL及樣品溶液0.3mL，分別置于50mL容量瓶中，加5%NaNO2溶液2mL，搖勻后放置6min，加10%Al

10、(NO3)3溶液2mL，搖勻，再放置6min，加20%NaOH溶液20mL，加水定容至刻度，搖勻，放置15min，以試劑空白為參比，采用紫外分光光度法在400700nm范圍進(jìn)行掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)。蘆丁對(duì)照品溶液顯色后的紫外吸收光譜最大吸收波長(zhǎng)在515nm附近，樣品溶液最大吸收波長(zhǎng)在485nm附近，二者的最大吸收波長(zhǎng)有偏差，由于本實(shí)驗(yàn)以蘆丁對(duì)照品溶液為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定樣品的總黃酮含量[5]，故確定515nm為測(cè)定波長(zhǎng)。蘆丁對(duì)照品溶液顯色后的紫

11、外吸收光譜最大吸收波長(zhǎng)在515nm附近，樣品溶液最大吸收波長(zhǎng)在485nm附近，二者的最大吸收波長(zhǎng)有偏差，由于本實(shí)驗(yàn)以蘆丁對(duì)照品溶液為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定樣品的總黃酮含量[5]，故確定515nm為測(cè)定波長(zhǎng)。2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0mL，分別置于50mL容量瓶中，按“2.2”項(xiàng)下操作，在515nm處測(cè)定吸光度，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲

12、線，得出線性回歸方程A=12.411C0.0143，相關(guān)系數(shù)r=0.9994，線性范圍0.0080.056mgmL1mgmL。2.4精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液10.0mL，置于50mL容量瓶中，按“2.2”項(xiàng)下操作，在515nm處測(cè)定吸光度，重復(fù)測(cè)定6次，RSD為0.92%，表明儀器精密度良好。2.5穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液10.0mL，置于50mL容量瓶中，按“2.2”項(xiàng)下操作，在515nm處測(cè)定吸光度，每隔10min測(cè)