山核桃葉總黃酮的提取分離與抗氧化作用的研究.pdf

1、山核桃可以提煉油脂,也可做成干果,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,但是在加工過(guò)程中皮渣以及葉子一般都被丟棄或用作飼料,極為浪費(fèi)。本論文研究了山核桃葉總黃酮的提取和精制工藝,同時(shí)探討了山核桃葉總黃酮的抗氧化作用。研究試驗(yàn)得到的結(jié)果如下： 1.山核桃葉的提取液與鹽酸-鎂的定性試驗(yàn),測(cè)定反應(yīng)溶液顯紫紅色；此液與金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng),均有明顯的橙黃色沉淀。用薄層層析(TLC)對(duì)山核桃葉提取物進(jìn)行定性鑒別,發(fā)現(xiàn)提取物在硅膠G板上與蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品相同Rf值處出現(xiàn)

2、了與其相同的鮮黃色斑點(diǎn),Rf值為0.35。表明,山核桃葉的提取物中含有黃酮類物質(zhì)。 2.本研究采用乙醇提取山核桃葉總黃酮,其總黃酮的純度隨提取溫度、提取時(shí)間、乙醇濃度、料液比的增加而提高,通過(guò)正交試驗(yàn)提取山核桃葉總黃酮,結(jié)果表明,最高得率組為A2B3C1D2,達(dá)18.9568％,最低得率組是A1B1C1D1,僅8.1796％：同時(shí),山核桃葉總黃酮純度最高組是A2B1C2D3,其純度為13.0533％,純度最低是A1B1C1D1,

3、僅8.8584％。從目的物純度考察,4個(gè)因素的最佳水平組合為A2B1C2D3,即80％乙醇、液料比1:20、提取時(shí)間6h、提取溫度90℃。 3.以總黃酮純度為考察對(duì)象,通過(guò)幾種分離純化方法,即石灰乳-硫酸法、萃取法、硅藻土法、大孔樹脂法,發(fā)現(xiàn)經(jīng)大孔樹脂分離的山核桃葉總黃酮的純度含量最高,達(dá)59.63％,硅藻土法最低,黃酮含量?jī)H25.37％；以總黃酮的得率為考察對(duì)象,得知萃取法分離的總黃酮得率最高,為1.113％,石灰乳-硫酸法分

4、離得出的總黃酮的得率最低,僅0.638％。 4.試驗(yàn)結(jié)果表明山核桃葉總黃酮具有明顯的抗氧化作用。 (1)對(duì)豬油抗氧化活性的測(cè)定。從檢測(cè)結(jié)果可以看出,隨著山核桃葉總黃酮添加到豬油中的量的增加,豬油的POV值和酸價(jià)上升的趨勢(shì)逐漸減緩。從POV值看出,在第12天測(cè)量,0.2％山核桃葉總黃酮組POV值僅有4.03(med/kg),而空白組的POV值已經(jīng)超過(guò)8.0(med/kg);從豬油的酸價(jià)的測(cè)定值可以看出,添加0.2％山核桃葉

5、總黃酮組的豬油,在第12天添酸價(jià)僅有4.8(kgKOH/g),而空白組的酸價(jià)上升到8.2(kgKOH/g),表明山核桃葉總黃酮具有抗豬油酸敗的作用,并且隨著劑量的增加抗氧化活性增強(qiáng)。 (2)對(duì)衰老小鼠的抗衰老作用。灌胃42天后,可知,山核桃葉總黃酮能抑制并且減緩由D-半乳糖引起的機(jī)體衰老,能使衰老小鼠血清中的SOD活性增強(qiáng),MDA含量降低,并且能抑制腦組織中MAO活性。各組SOD值中,高劑量組的SOD活力最高,達(dá)167.10(U

6、/mL),衰老模型組最低,僅136.01(U/mL),表明山核桃葉總黃酮可以增強(qiáng)小鼠血清中SOD活性；通過(guò)對(duì)各組MDA含量的對(duì)比,可以看出,衰老模型組最高,達(dá)18.95(nmol/mL),山核桃葉總黃酮高劑量組最低,僅14.88(nmol/mL),說(shuō)明山核桃葉總黃酮具有降低小鼠血清MDA含量的作用；通過(guò)檢測(cè)得出,衰老模型組小鼠腦組織MAO含量最高,達(dá)26.42(U/mg),山核桃葉總黃酮高劑量組最低,僅13.63(U/mg),表明山核桃

7、葉總黃酮可以抑制小鼠腦組織中MAO活性。通過(guò)對(duì)小鼠血清SOD、MDA以及腦組織的MAO活性的檢測(cè),各組試驗(yàn)結(jié)果表明山核桃葉總黃酮具有增強(qiáng)小鼠體內(nèi)抗氧化、延緩機(jī)體衰老的作用。 (3)對(duì)自由基的清除作用。山核桃葉總黃酮濃度為1.0mg/mL時(shí),對(duì)羥自由基(·OH)的清除作用最大,清除率達(dá)63％,黃酮濃度為0.8mg/mL組的清除率次之,黃酮濃度0.2mg/mL組對(duì)羥自由基(·OH)的清除作用最小,清除率僅22％,說(shuō)明山核桃葉總黃酮對(duì)羥自由基