王漿酸的安全性評(píng)價(jià)及對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、自20世紀(jì)90年代開(kāi)始，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)王漿酸功能及其價(jià)值不斷探究，王漿酸保健效果日益受到大眾的青睞，但面對(duì)從天然物提取出的王漿酸供不應(yīng)求的整體行業(yè)情況。人工合成王漿酸領(lǐng)域得到了研究人員的越來(lái)越多的重視，各種人工合成技術(shù)有了長(zhǎng)足的發(fā)展，而關(guān)于人工合成王漿酸的安全性和營(yíng)養(yǎng)功能也成為評(píng)價(jià)王漿酸質(zhì)量體系的重點(diǎn)環(huán)節(jié)。本試驗(yàn)對(duì)石家莊康諾生物技術(shù)有限公司具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的王漿酸干粉進(jìn)行安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)，并且研究了王漿酸對(duì)急性酒精性肝損傷小鼠的護(hù)肝作用及

2、其機(jī)理。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　研究方法:
　　1.王漿酸安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)。按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（2003年版）中的方法，主要進(jìn)行了小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)，鼠傷寒沙門(mén)氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)），小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)，小鼠精子畸形試驗(yàn)，大鼠30天喂養(yǎng)試驗(yàn)。
　　2.王漿酸對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用。試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組和低、中、高三個(gè)劑量組，劑量組分別為33、66、99mg/(kg

3、·bw)，陽(yáng)性對(duì)照組用35 mg/(kg·bw)水飛薊灌胃，連續(xù)灌胃30d。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)用50％的無(wú)水乙醇造模，稱(chēng)量小鼠體重計(jì)算肝指數(shù)，檢測(cè)小鼠血清中AST、ALT、TG、TC、VLDL-C和LDL，分析王漿酸對(duì)小鼠肝功能和血脂的影響，并對(duì)肝臟進(jìn)行病理組織形態(tài)學(xué)檢查。
　　3.王漿酸護(hù)肝機(jī)制初探。在王漿酸對(duì)肝損傷保護(hù)作用試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，通過(guò)檢測(cè)肝組織SOD、MDA、GSH-Px、GSH評(píng)價(jià)王漿酸對(duì)急性酒精肝中毒的肝臟抗氧化能力的影響;

4、通過(guò)檢測(cè)血清和肝組織中ALDH和ADH活性，判定王漿酸對(duì)肝臟酒精代謝能力的影響;檢測(cè)肝組織中MAO、TNOS和iNOS活性，分析王漿酸是否具有對(duì)肝臟細(xì)胞因子的輔助調(diào)控作用。
　　試驗(yàn)結(jié)果:
　　1.王漿酸安全性評(píng)價(jià)。小鼠急性毒性試驗(yàn)，小鼠無(wú)死亡及明顯中毒情況，LD50＞20mg/kgbw。Ames試驗(yàn)結(jié)果表明，王漿酸各試驗(yàn)組回變菌落數(shù)均未超過(guò)空白對(duì)照組的2倍，亦無(wú)劑量反應(yīng)關(guān)系，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理P＜0.05;小鼠骨髓微核試驗(yàn)，三個(gè)劑

5、量組的微核率均＜4‰，與陰性對(duì)照組相比均不存在顯著性差異(P＜0.05);小鼠精子畸形試驗(yàn)，精子畸形率均小于3.4‰，與陰性對(duì)照組相比均不存在顯著性差異(P＜0.05)。大鼠30天喂養(yǎng)試驗(yàn)，各組動(dòng)物生長(zhǎng)狀況正常，血液學(xué)、血液生化學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)與陰性對(duì)照組相比均無(wú)明顯差異(P＜0.05)，主要臟器病理組織學(xué)觀察結(jié)果均未見(jiàn)異常。
　　2.王漿酸對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用。各組小鼠體重?zé)o明顯差異，肝指數(shù)與王漿酸劑量呈正相關(guān)。王漿酸可以

6、明顯降低血清中AST和ALT活性、減少TG、TC、VLDL-C和LDL含量。與模型組相比，低劑量即呈現(xiàn)顯著差異，TC、TG和LDL-C分別降低了23.50％、23.92％(P＜0.01)和5.06％; ALT和AST酶活力分別下降了3.79％和15.98％。肝臟組織病理學(xué)觀察，模型組肝細(xì)胞受到明顯損傷，細(xì)胞索紊亂，細(xì)胞腫脹呈氣球樣變，胞質(zhì)內(nèi)有脂肪空泡和水樣變性情況，匯管區(qū)大量炎細(xì)胞侵潤(rùn)，胞漿內(nèi)可見(jiàn)顆粒狀不規(guī)則形酒精小體，說(shuō)明造模成功。低

7、劑量組表現(xiàn)與模型組近似，中、高劑量組有明顯改善，表現(xiàn)為胞質(zhì)緊密，肝細(xì)胞內(nèi)酒精小體數(shù)量減少，脂肪空泡和水樣變性程度降低。陽(yáng)性對(duì)照組，肝細(xì)胞呈正常多邊形，組織結(jié)構(gòu)清晰，脂肪空泡和水樣變性數(shù)量較少。
　　3.王漿酸護(hù)肝機(jī)制初探。王漿酸能夠明顯促進(jìn)肝臟組織細(xì)胞分泌ALDH和ADH含量，低劑量組與模型組相比即呈現(xiàn)極顯著性差異，ALDH和ADH含量分別提高了21.69％13.80％(P＜0.01)。與模型對(duì)照組相比，各劑量組小鼠肝臟抗氧化功能

8、均有不同程度的改善，低劑量小鼠SOD、GSH-Px和GSH活力分別提高了11.84％、57.01％和60.18％; MDA含量降低了17.04％（P＜0.01）。模型組細(xì)胞因子MAO、TNOS和iNOS活性升高，而各劑量組小鼠的MAO活性隨劑量升高而降低，TNOS和iNOS活力隨王漿酸劑量升高明顯升高，其中中劑量組與模型組對(duì)比效果明顯(P＜0.01)，MAO活性降低了24.13％，TNOS和iNOS活性分別升高了83.56％和107.6