高靈敏近同時分析多種“瘦肉精”殘留的電化學發(fā)光免疫傳感器陣列.pdf

1、現(xiàn)今，克倫特羅(CLB)，萊克多巴胺(RAC)，沙丁胺醇(SAL)等β2-受體激動劑，由于其可以促進動物生長，抑制脂肪合成，常作為“瘦肉精”被非法濫用。其容易殘留，且具有一定毒性，已在一些國家引起了嚴重的食品安全事故。鑒于它們對于人類健康潛在的危害，歐盟、中國、日本等世界上大多數(shù)國家都禁止將β2受體激動劑作為動物生長促進劑使用，并對其進行嚴格監(jiān)控。多種色譜方法已被應用于同時檢測多種“瘦肉精”殘留，比如液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)聯(lián)用技術(shù)

2、，氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)，高效液相色譜法(HPLC)、毛細管電泳法(CE)等。但是這些方法往往需要耗時的樣品預處理過程，并需要依靠昂貴而精密的儀器，所以一般只是作為確證與精確定量的方法。近年來，一些基于酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)、電化學、熒光、化學發(fā)光分析的免疫分析方法已在單組份β2-受體激動劑分析中，顯示了良好的應用前景。這些免疫分析方法的樣品預處理過程比較簡單，分析通量高，尤其適合應用于快速篩查。遺憾的是，目前僅能

3、找到極少的可同時檢測多種β2-受體激動劑的多組分免疫分析(MIA)的文獻報道。因而發(fā)展一種高靈敏的多組分免疫分析方法用以檢測多種“瘦肉精”殘留，將具有重大的實用價值。
　　 近來，電化學發(fā)光(ECL)分析吸引了廣泛關(guān)注，由于具有優(yōu)良的空間與時間的可控性，其被認為尤其適合構(gòu)建免疫傳感器。并且由于它的高靈敏度的優(yōu)點，ECL分析被認為適合檢測低濃度水平的β2受體激動劑殘留。本文首先成功構(gòu)建了單組分的ECL免疫傳感器，實現(xiàn)了對CLB的高

4、靈敏檢測。而后，我們將以上研究成果用于以絲網(wǎng)印刷電極作為基底的ECL免疫傳感器陣列的組裝，實現(xiàn)了對RAC與SAL這兩種“瘦肉精”高靈敏近同時分析。主要工作如下:
　　 (1)電化學發(fā)光免疫傳感器高靈敏檢測豬尿中痕量的克倫特羅殘留。
　　 一種高靈敏的ECL免疫傳感器第一次應用于檢測豬尿中痕量的CLB殘留。在該實驗體系中，選用具有成膜性良好，并且生物相容性與導電性俱佳的殼聚糖-納米金復合物固定抗原;合成了Ru(bpy)32

5、+標記CLB抗體，將其作為ECL探針。采用競爭免疫分析模式，實現(xiàn)對CLB的高靈敏檢測，得到CLB的線性檢測范圍為0.010-1.0ng/mL，檢測限(LOD)為0.0050ng/mL。將該ECL免疫傳感器應用于豬尿中CLB的分析，結(jié)果令人滿意。由于該方法操作簡單，分析時間較短，檢測靈敏度較高，非常適合痕量CLB殘留的篩查。
　　 (2)電化學發(fā)光免疫傳感器陣列高靈敏近同時分析豬尿中多種“瘦肉精”殘留。
　　 結(jié)合以上的實

6、驗結(jié)果，以自制的絲網(wǎng)印刷碳電極作為基底，設計了一種ECL免疫傳感器陣列。將RAC與SAL的抗原分別固定于該陣列的不同工作電極表面。競爭免疫反應后，借助自制的單刀四擲開關(guān)，以光電倍增管依次采集該陣列上的ECL信號。從而實現(xiàn)了對RAC與SAL的近同時分析，其線性檢測范圍分別為0.025-3.0與0.050-10ng/mL，LOD分別為8.5與17pg/mL。該ECL免疫傳感器陣列成功避免了相鄰反應區(qū)域間由光信號擴散與電活性產(chǎn)物擴散所致的交叉