中國部分地區(qū)人體糞便中雙歧桿菌的分離鑒定及具潛在益生特性菌株的篩選.pdf

1、本研究采用選擇性培養(yǎng)基對河南、四川、西藏、云南、內(nèi)蒙古和新疆等地區(qū)的18份人體糞便樣品中的雙歧桿菌進行了分離純化，并采用16S rRNA基因序列分析法對分離到的29株雙歧桿菌進行了鑒定。以B.animalis subsp.lactis V9為參照，通過耐酸性、人工消化液和膽鹽耐受試驗，篩選出胃腸道轉(zhuǎn)運過程中耐受性較好的4株雙歧桿菌。并對篩選出的雙歧桿菌進行了脫脂乳發(fā)酵特性和貯藏特性的研究。
　　試驗結(jié)果表明，從18位中國部分地區(qū)健

2、康人體糞便中分離得到29株雙歧桿菌，經(jīng)16S rRNA基因序列分析法將IMAUFB064、IMAUFB065和IMAUFB091等9株菌鑒定為B. longum，其中河南6株、四川2株和新疆1株；將IMAUFB071、IMAUFB073、IMAUFB084、IMAUFB090和IMAUFB092等20株菌鑒定為B.pseudocatenulatum，其中四川9株、西藏7株、云南3株和內(nèi)蒙古1株。29株雙歧桿菌中有24株在pH3.0、3.

3、5和4.0的改良MRS培養(yǎng)液中生長良好，初篩出的24株雙歧桿菌分別經(jīng)pH3.0、2.5、2.0人工胃液消化3h后，存活率高于V9（84.97％）的菌株有2株，分別為IMAUFB084（85.98%）和IMAUFB073（85.66%），占總菌數(shù)的6.90%，各菌株在不同pH值人工胃液中耐受性有顯著差異（P<0.05），隨著pH值的降低，供試菌株對模擬人工胃液的耐受性也隨之降低。4株復篩出的雙歧桿菌在人工腸液消化8h后，其中IMAUFB0

4、90的存活率為101.8%，高于V9（97.84%），IMAUFB073（97.19%）、IMAUFB084（94.38%）和IMAUFB064（89.93%）都低于V9的存活率。
　　4株雙歧桿菌均能耐受2.0%膽鹽濃度，但各菌株的延遲時間差異顯著（p﹤0.05），IMAUFB064延遲時間為0.59h，為可耐受膽鹽菌株；IMAUFB084、IMAUFB073和IMAUFB090的延遲時間表明其為輕微耐受膽鹽菌株；參考菌株 V9

5、的延遲時間為0.25h，為對膽鹽不敏感菌株，顯而易見，各供試菌株對膽鹽的耐受性均低于V9。
　　分別以IMAUFB064、IMAUFB073、IMAUFB084、IMAUFB090和V9單菌株發(fā)酵制備酸乳，結(jié)果表明：IMAUFB073到達發(fā)酵終點的時間最短，僅用了18h，發(fā)酵結(jié)束時活菌數(shù)為6.02×108，IMAUFB090、V9、IMAUFB084和IMAUFB064到達發(fā)酵終點的時間均為21h，活菌數(shù)分別為5.44×108、5