茶葉主要糖苷類香氣前體物質(zhì)的色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析研究及初步分離.pdf

1、茶鮮葉中的糖苷類香氣前體是茶樹生長(zhǎng)發(fā)育過程中形成的次級(jí)代謝產(chǎn)物,其含量較少且無味。在特定條件下,如采摘、機(jī)械損傷、昆蟲取食、病菌侵染等,葉片中糖苷類香氣前體與內(nèi)源酶接觸會(huì)酶解釋放出揮發(fā)性苷元,呈現(xiàn)出特定的氣味,是構(gòu)成成品茶香氣的物質(zhì)基礎(chǔ)。由于糖苷類香氣前體在茶葉中含量極低,難以分離獲得完整的標(biāo)樣,因而無法進(jìn)行定量分析,制約了該領(lǐng)域研究的深入。本文對(duì)茶葉中糖苷類香氣前體進(jìn)行了初步的分析鑒定和分離純化,為其后續(xù)的大量分離制備研究及定量分析方

2、法的建立提供參考,總結(jié)如下:
　　1.糖苷類香氣前體的富集
　　用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇4種極性由小到大的溶劑對(duì)綠茶樣品依次進(jìn)行超聲波提取,GC-MS輔助分析各提取部位酶解后的揮發(fā)性苷元,確定糖苷類香氣前體在甲醇部位富集;使用HPD-500大孔吸附樹脂對(duì)甲醇部位提取物進(jìn)行柱色譜分析,用不同濃度的甲醇梯度洗脫,GC-MS分析各洗脫部位酶解后的苷元。分析結(jié)果表明,大孔吸附樹脂對(duì)糖苷類香氣前體有很好的富集作用,香氣前體主

3、要集中在20％甲醇部位;對(duì)20%甲醇部位樣品用氯仿萃取去除咖啡堿,堿式乙酸鉛沉淀茶多酚,得糖苷類香氣前體粗提物。
　　2.綠茶中糖苷類香氣前體的分析鑒定
　　對(duì)粗提物中糖苷類香氣前體進(jìn)行分析鑒定。
　?、俨捎蔑w行時(shí)間質(zhì)譜(TOF/MS)得出準(zhǔn)確相對(duì)分子量和匹配的分子式,并結(jié)合高效液相色譜-電噴霧多級(jí)質(zhì)譜(HPLC-ESI-MSn)鑒定了11種糖苷類香氣前體物質(zhì);
　?、谔接懥瞬枞~中可能存在的糖苷類香氣前體在ESI

4、(-)離子模式下的裂解規(guī)律。
　　3.糖苷類化合物的分離純化
　　利用多種色譜分離方法(硅膠柱色譜、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、ODS柱)對(duì)糖苷類香氣前體粗提物進(jìn)行分離,采用電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)和核磁共振譜(13C-NMR、1H-NMR)對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,共分離到3個(gè)糖苷類化合物,分別為:山柰酚-3-O-β-葡萄糖苷(化合物4)、松柏醇-β-D葡萄糖苷(化合物5)、腺嘌呤核苷(化合物6);3個(gè)