酶解制備豬肩胛骨降血壓肽及其分離純化的研究.pdf

1、本論文以豬肩胛骨為原料，通過酶解制備降血壓肽，以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiot-ensinⅠ-Converting Enzyme，ACE)抑制率為主要指標(biāo)，篩選出最適酶作為酶解用酶;通過單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化該種酶的酶解條件;在此基礎(chǔ)上，對(duì)酶解底物進(jìn)行超聲波預(yù)處理，通過單因素和響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化超聲條件;利用超濾、凝膠層析等分離純化技術(shù)從酶解液中分離純化降血壓肽;探討豬肩胛骨降血壓肽耐消化特性及各種理化因素對(duì)其穩(wěn)定性的影響。研究結(jié)果如下。<

2、br>　　篩選出的最適蛋白酶為風(fēng)味蛋白酶，最佳酶解條件為:pH7.0、底物濃度5％、酶解溫度53℃、酶解時(shí)間4.5 h、酶底比6900U/g。此條件下制備出豬肩胛骨降血壓肽的ACE抑制率為65.31％，半數(shù)抑制濃度(Half-inhibitory concentration，IC50)為1.34 mg/mL。
　　對(duì)底物的超聲條件進(jìn)行優(yōu)化，獲得的最佳超聲條件為:超聲時(shí)間25 min，超聲功率717W，超聲溫度40℃，酶解時(shí)間3h。

3、此條件下制備出ACE抑制率為75.58％的豬肩胛骨降血壓肽。IC50值為0.90 mg/mL。
　　采用超濾離心管將酶解液分離為分子量大于10 kDa、5 kDa-10 kDa和小于5 kDa的3個(gè)組分，其中，在相同濃度條件下分子量小于5 KDa的組分ACE抑制率最高， IC50為1.12 mg/mL。
　　超濾分級(jí)后分子量小于5 kDa的組分用凝膠層析進(jìn)一步分離。考察樣品濃度、流速、進(jìn)樣量對(duì)分離效果的影響，獲得最適分離條件

4、。凝膠層析的最適條件:樣品濃度為20mg/mL，洗脫液的流速為0.5 mL/min，進(jìn)樣量為1.2 mL。在此條件下，分離得到6個(gè)峰，其中峰2抑制活性最高，該組分IC50為0.56 mg/mL。
　　探討豬肩胛骨降血壓肽耐消化特性及各種理化因素對(duì)其穩(wěn)定性的影響。體外模擬消化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，分子量小于5 kDa的降血壓肽的胃腸道穩(wěn)定性優(yōu)于酶解液，模擬胃、腸消化液未對(duì)超濾液中降血壓肽的穩(wěn)定性產(chǎn)生負(fù)面影響。豬肩胛骨降血壓肽在-20℃、4℃