免疫分析法在食品防腐劑苯甲酸鈉檢測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf

1、苯甲酸鈉，苯甲酸的鈉鹽，常用于食品儲(chǔ)存中的化學(xué)添加劑，以防止因微生物引起的食物腐敗和霉變。苯甲酸和苯甲酸鈉可抑制大部分的真菌、霉菌和細(xì)菌的生長。因?yàn)楸郊姿徕c具有良好的穩(wěn)定性以及良好的水溶性，所以它更廣泛的應(yīng)用于許多種類的食物和飲料中。然而，過量攝入這種添加劑或許會(huì)對(duì)消費(fèi)者有潛在的危害性，比如會(huì)引起過敏性皮炎、蕁麻疹、驚厥以及肝細(xì)胞的損害等等。此外，添加劑的過度使用會(huì)使防腐劑殘留變作環(huán)境污染物。由于這些原因，食物中嚴(yán)格限制添加苯甲酸及其鈉

2、鹽作為防腐劑。在我國，根據(jù)GB2760-2011國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，在不同種類的食物中苯甲酸及其鈉鹽的限制適用量的范圍是0.2-2.0 g/kg。然而，因?yàn)楸郊姿峒捌溻c鹽價(jià)廉、易得，許多不法商家為了追求利益仍然在食品中大量添加這些防腐劑。因此，建立一種簡單，快速，經(jīng)濟(jì)實(shí)用的分析方法用于測(cè)定苯甲酸及其鈉鹽對(duì)食品安全是非常重要的。
　　用于測(cè)定苯甲酸及其鈉鹽的方法有很多。檢測(cè)苯甲酸及其鈉鹽的傳統(tǒng)分析方法有薄層色譜法(TLC)、氣相色譜法

3、(GC)、毛細(xì)管電泳法(CE)、膠束電動(dòng)力學(xué)色譜法。目前，苯甲酸及其鈉鹽的主要分析方法是高效液相色譜法(HPLC)。據(jù)報(bào)道還有很多其他方法用于苯甲酸及其鈉鹽的檢測(cè)，包括二階導(dǎo)數(shù)分光光度法、化學(xué)計(jì)量學(xué)增敏分光光度法、近紅外反射光譜法、極譜法和酶檢測(cè)。然而，這些分析方法都不夠簡便，所用的儀器比較昂貴，分析過程比較耗時(shí)，甚至在某些情況下，需要對(duì)樣品進(jìn)行提取、分離等各種預(yù)處理。
　　免疫分析方法，尤其是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)，具

4、有簡便、靈敏、特異性高，儀器設(shè)備簡單的優(yōu)勢(shì)，并可以一次測(cè)定大量樣品。然而，ELISA方法是固相的分析方法，需要多次重復(fù)清洗和一定的孵育時(shí)間（1-2小時(shí)）。熒光偏振免疫分析法(FPIA)是一種均相的篩選技術(shù)，不需要分離和清洗，可以快速、高效、簡便地應(yīng)用于食品和環(huán)境分析。目前還沒有采用FPIA方法和ELISA方法檢測(cè)實(shí)際樣品中的苯甲酸及其鈉鹽的相關(guān)報(bào)道?；诖?，本研究建立了用于檢測(cè)苯甲酸鈉含量的FPIA法和間接ELISA法，并成功將建立的F

5、PIA方法應(yīng)用于實(shí)際體系的檢測(cè)。
　　本研究根據(jù)苯甲酸的結(jié)構(gòu)特征，設(shè)計(jì)合成了苯甲酸的免疫原、包被抗原和熒光標(biāo)記抗原，得到了多克隆抗體。在優(yōu)化出的最佳條件下，分別建立了用于檢測(cè)苯甲酸鈉含量的FPIA法和間接ELISA法。FPIA方法的靈敏度(IC50)為2.48μg/mL，檢測(cè)限(IC20)為0.26μg/mL，工作范圍是0.3μg/mL-20μg/mL。選擇了11種苯甲酸的類似物與苯甲酸抗體進(jìn)行了交叉反應(yīng)的測(cè)定。在線性范圍內(nèi)檢測(cè)該

6、方法在理論體系和實(shí)際體系中的精密度和準(zhǔn)確度，其加樣回收率分別在91.41-106.27％和86.97-109.87％之間，變異系數(shù)均未超過11.25％。此外，還將此方法檢測(cè)食品中的苯甲酸鈉含量與HPLC方法相比較，進(jìn)一步驗(yàn)證了其準(zhǔn)確度。ELISA方法的靈敏度(IC50)為2.53μg/mL，檢測(cè)限(IC20)為0.77μg/mL，工作范圍在0.5μg/mL-10μg/mL之間，還考察了苯甲酸抗體與多種結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率。