胰島素樣生長(zhǎng)因子-1對(duì)rbMP-2誘導(dǎo)下成纖維細(xì)胞增殖及成骨轉(zhuǎn)化的影響.pdf

1、目的:觀察胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF—Ⅰ)在重組入骨形成蛋白2(rhBMP-2)誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞(Fb)轉(zhuǎn)化為成骨細(xì)胞中的影響,探討IGF—Ⅰ對(duì)Fb在體外誘導(dǎo)成骨的過程中是否具有促進(jìn)作用。
　　 方法:Fb來源于成年新西蘭大白兔(由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。分離、純化提取成纖維細(xì)胞,然后培養(yǎng)。將細(xì)胞分為:空白對(duì)照組、rhBMP-2干預(yù)組和IGF—Ⅰ+rhBMP-2干預(yù)組?？瞻讓?duì)照組:常規(guī)培養(yǎng)液培養(yǎng),不加入任何誘導(dǎo)劑及干預(yù)因

2、子；rhBMP-2干預(yù)組:常規(guī)培養(yǎng)液中加入100ng／ml的rhBMP-2；IGF—Ⅰ+rhBMP-2干預(yù)組:常規(guī)培養(yǎng)液中加入l00ng／ml的rhBMP-2與終濃度為50ng／ml的IGF-Ⅰ。定期在倒置顯微鏡下觀察Fb生長(zhǎng)狀況,并采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,同時(shí)行堿性磷酸酶(ALP)活性檢測(cè)、茜素紅染色及鈣鈷染色評(píng)價(jià)其成骨分化的能力。
　　 結(jié)果:
　　 1.與其它兩組相比,IGF—Ⅰ+rhBMP-

3、2組細(xì)胞增殖速度快,周期短,MTT法檢測(cè),細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛(P<0.05),而空白對(duì)照組與rhBMP-2干預(yù)組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 2.rhBMP-2干預(yù)組ALP表達(dá)高于空白對(duì)照組(P<0.01)；而IGF-Ⅰ+rhBMP-2組ALP表達(dá)明顯高于其它2組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 3.茜素紅染色空白對(duì)照組未見明顯鈣化結(jié)節(jié),rhBMP-2干預(yù)組細(xì)胞可見紅色鈣化結(jié)節(jié),而IGF-Ⅰ+rhBMP-

4、2組鈣化結(jié)節(jié)數(shù)目明顯較成骨誘導(dǎo)對(duì)照組多,面積增大。
　　 4.鈣鈷染色:rhBMP-2干預(yù)組和IGF—Ⅰ+rhBMP-2干預(yù)組細(xì)胞胞漿中均可見淺棕色至棕黑色的細(xì)胞顆粒。但以IGF—Ⅰ+rhBMP-2干預(yù)組棕黑色顆粒較多。空白對(duì)照組未見明顯陽(yáng)性細(xì)胞。
　　 結(jié)論:
　　 1.Fb在體外一定條件下經(jīng)過誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)后,可向成骨細(xì)胞方向轉(zhuǎn)化。
　　 2.IGF—Ⅰ可以促進(jìn)Fb在rhBMP-2誘導(dǎo)下的增殖。