脊髓損傷早期大鼠股骨遠(yuǎn)端骨量丟失的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：
　　 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立脊髓挫傷模型，觀(guān)察脊髓損傷平面以下骨礦物質(zhì)密度，破骨細(xì)胞數(shù)量，骨骼微觀(guān)結(jié)構(gòu)及動(dòng)態(tài)組織形態(tài)學(xué)的改變，反映脊髓損傷早期骨質(zhì)疏松的發(fā)生情況，揭示損傷平面以下骨量丟失的病理機(jī)制。
　　 研究方法：
　　 1．實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕ⅲ?0只7周齡SD大鼠隨機(jī)分為3組（每組20只），體重控制在200-250g。對(duì)照組（假手術(shù)組）：切除T10椎板，不損傷硬膜及脊髓；脊髓損傷（SCI）組：切除T10椎板，

2、行Allen's 脊髓沖擊法(10g?60mm)造成脊髓損傷；制動(dòng)組：采用腿－尾縫合法，造成大鼠雙側(cè)下肢制動(dòng)。建模后第1、7天，采用BBB 評(píng)分法評(píng)估大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)10天后處死，進(jìn)行下一步研究。
　　 2．骨密度（Bone minerAldensity，BMD）測(cè)定：選取左側(cè)股骨及同側(cè)尺、橈骨，使用雙能X 線(xiàn)骨密度檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。
　　 3．骨微觀(guān)結(jié)構(gòu)的觀(guān)測(cè)：采用顯微CT對(duì)右側(cè)股骨

3、干骺端及其臨近的股骨干部分進(jìn)行薄層掃描（以15μm 遞增）并行三維重建。測(cè)量骨骼相關(guān)指標(biāo)：骨礦物質(zhì)含量（BMC）、骨表面積體積比（BS/TV）、骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）、皮質(zhì)骨面積（Ct.Ar）、皮質(zhì)骨厚度（Ct.Th）、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)（SMI）、骨小梁數(shù)量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁分離度（Tb.Sp）。三組數(shù)據(jù)間兩兩進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。
　　 4.動(dòng)態(tài)組織形態(tài)學(xué)研究：建模后第2、9天，對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠皮下注射鈣黃綠素（

4、10mg/kg）進(jìn)行標(biāo)記，處死后行骨形態(tài)學(xué)分析，評(píng)估成骨情況。
　　 5. 特殊染色評(píng)估骨吸收狀況：選取大鼠右側(cè)股骨干骺端制作厚5μm的石蠟切片，采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色以顯示破骨細(xì)胞（陽(yáng)性者顯示為著色的多核細(xì)胞），并對(duì)切片中股骨干骺端行破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)分析（AxioVision Rel.4.7 軟件），單位：破骨細(xì)胞數(shù)目/骨骺板（mm）。
　　 結(jié)果：
　　 1.骨密度：建模后10天，與對(duì)照組相比，S

5、CI組及制動(dòng)組的大鼠股骨遠(yuǎn)端骨密度均明顯下降（p<0.01），且SCI組的大鼠股骨遠(yuǎn)端骨密度下降更加顯著（p<0.01）。
　　 實(shí)驗(yàn)大鼠的尺橈骨密度在SCI組、制動(dòng)組，對(duì)照組三組中的差異均無(wú)顯著性（p>0.1）。
　　 2.骨微觀(guān)結(jié)構(gòu)的觀(guān)察：從CT 圖像上分析，與對(duì)照組相比，制動(dòng)組及SCI組的大鼠股骨干皮質(zhì)密度降低，厚度變?。还撬枨恢?，骨小梁數(shù)量變少，連接疏松且形態(tài)、結(jié)構(gòu)紊亂，部分骨小梁斷裂、不連續(xù)。SCI組與制動(dòng)組相

6、比，SCI組的大鼠皮質(zhì)骨和松質(zhì)骨形態(tài)改變更加顯著，骨結(jié)構(gòu)更加疏松。
　　 骨骼相關(guān)指標(biāo)定量分析：與對(duì)照組相比，SCI組及制動(dòng)組的大鼠股骨遠(yuǎn)端整體骨礦物質(zhì)含量均有不同程度的下降（P<0.05），骨小梁結(jié)構(gòu)模型指數(shù)變大（P<0.05），骨體積分?jǐn)?shù)表變小（P<0.05），骨表面積體積比變大（P<0.05），骨小梁數(shù)目變少（P<0.05），骨小梁厚度變?。≒<0.05），骨小梁分離度增大（P<0.05），骨皮質(zhì)面積減?。≒<0.05），

7、皮質(zhì)骨厚度變?。≒<0.05）。與制動(dòng)組相比較，SCI組的上述各項(xiàng)指標(biāo)變化的程度更甚。
　　 3.動(dòng)態(tài)組織形態(tài)學(xué)觀(guān)察：對(duì)照組切片中骨小梁周?chē)梢?jiàn)清晰、獨(dú)立的兩條熒光條帶，提示成骨良好；制動(dòng)組切片中大多數(shù)骨小梁周?chē)梢?jiàn)單獨(dú)的熒光條帶，少數(shù)的骨小梁附近形成兩條熒光條帶，但條帶之間模糊，重疊，分界不清，提示成骨不良；
　　 SCI組切片中骨小梁周?chē)鷥H見(jiàn)一條熒光條帶，且條帶不連續(xù)，提示嚴(yán)重的成骨障礙。
　　 4.TRAP

8、 染色：SCI組中股骨干骺端破骨細(xì)胞增多、聚集，大量的破骨細(xì)胞吸附在骨小梁上，表現(xiàn)出了較強(qiáng)的骨吸收活性；制動(dòng)組中僅見(jiàn)少量破骨細(xì)胞，而對(duì)照組中破骨細(xì)胞數(shù)量則更少。細(xì)胞計(jì)數(shù)同樣顯示：與對(duì)照組和制動(dòng)組相比，SCI組的大鼠股骨干骺端破骨細(xì)胞數(shù)量明顯增多（p<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1.脊髓損傷及制動(dòng)因素均可以引起骨量的丟失，但兩者在骨量丟失的速度、程度及發(fā)生機(jī)制上均有所不同。
　　 2.脊髓損傷早期由于破骨細(xì)胞