放療聯(lián)合化療對(duì)大鼠脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 在惡性腫瘤的治療中，放射治療是主要的治療手段之一，在針對(duì)頭頸部、胸部(肺和食管)、脊柱旁或脊髓等部位的各種惡性腫瘤進(jìn)行放療時(shí)，脊髓常常不可避免受到照射，甚至可能使部分患者引起放射性脊髓損傷。目前惡性腫瘤的治療越來越趨向于綜合治療，尤其是放療和化療的聯(lián)合在臨床中廣泛應(yīng)用。因此在與化療聯(lián)合治療腫瘤時(shí)，由于化療藥物本身的細(xì)胞毒性和對(duì)放射的增敏作用，可能加重脊髓的損傷。迄今，對(duì)于放療、化療引起脊髓損傷機(jī)制及放化療聯(lián)合引起脊髓損傷

2、機(jī)制的研究很少，仍有許多尚不清楚的領(lǐng)域，尤其是化療藥物本身對(duì)于脊髓的損傷尚未引起臨床及基礎(chǔ)研究的重視。本實(shí)驗(yàn)采用化療與分次照射相結(jié)合的方法，建立人類脊髓放射損傷效應(yīng)研究的動(dòng)物模型。利用此模型，分組檢測放療、化療以及聯(lián)合治療時(shí)大鼠脊髓損傷的程度，光鏡與電鏡下觀察損傷脊髓組織的形態(tài)學(xué)變化。并進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢測caspase-3、Bax、IL-1β及iNOS陽性細(xì)胞的表達(dá)，探討大鼠脊髓損傷后上述生物因子在損傷脊髓的表達(dá)及意義。為臨床進(jìn)一

3、步提高放、化療綜合治療的療效，降低脊髓損傷的發(fā)生率提供理論依據(jù)。 方法： 選取50只大鼠分四大組，即空白組、單純放療組、單純化療組和放化療聯(lián)合組。單純化療組分為蓋諾組、健擇組、順鉑+蓋諾組、順鉑+健擇組；放化療聯(lián)合組分為蓋諾+放療組、健擇+放療組、順鉑+蓋諾+放療組、順鉑+健擇+放療組，共10組，每組5只大鼠。健擇30mg/kg，蓋諾1.5mg/kg，單次給予；順鉑5mg/kg聯(lián)合用藥，兩藥間隔30min。放射劑量為5G

4、y/次，采用6MeV的電子線，2cm×4em的照射野照射大鼠胸段脊髓，隔日一次，總劑量為40Gy。放化療聯(lián)合組藥物與照射的間隔時(shí)間為3天。照射結(jié)束后20周，用4％多聚甲醛進(jìn)行活體灌注固定，分別進(jìn)行石蠟切片免疫組織化學(xué)染色檢測caspase-3、Bax、IL-1β及iNOS陽性細(xì)胞的表達(dá)，光鏡和電鏡觀察脊髓的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果： 1、光鏡和電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，各組脊髓分別出現(xiàn)損傷程度不一的改變：單純化療組出現(xiàn)神經(jīng)纖維部分脫髓鞘

5、的輕度反應(yīng)，單純放療組出現(xiàn)神經(jīng)纖維廣泛脫髓鞘的中度變性，放療聯(lián)合化療組出現(xiàn)神經(jīng)纖維完全脫髓鞘、血管內(nèi)皮細(xì)胞死亡，甚至膠質(zhì)細(xì)胞增生的重度變性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與人類脊髓放射性損傷的主要病理學(xué)變化一致： 2、免疫組織化學(xué)染色顯示正常對(duì)照組的caspase-3、Bax、IL-1β及iNOS僅存在低水平的基礎(chǔ)表達(dá)或不表達(dá)，放療聯(lián)合化療組脊髓組織陽性反應(yīng)表達(dá)較單純放療組或單純化療組表達(dá)明顯增強(qiáng)。單純放療組比單純化療各組陽性表達(dá)增強(qiáng)。 結(jié)論

6、： 1．通過光鏡觀察脊髓的形態(tài)學(xué)變化，提示單純化療、單純放療及放化聯(lián)合各組均出現(xiàn)脊髓損傷的形態(tài)學(xué)改變，即部分神經(jīng)纖維脫髓鞘的輕度反應(yīng)和神經(jīng)纖維廣泛脫髓鞘的中度變性以及神經(jīng)纖維完全脫髓鞘、血管內(nèi)皮細(xì)胞死亡、甚至膠質(zhì)細(xì)胞增生的重度變性。 2．通過電鏡觀察脊髓損傷的超微結(jié)構(gòu)，得出放化合并對(duì)脊髓的損傷要更重于單純放療組這一結(jié)論。順鉑+健擇對(duì)脊髓的損傷要重于單用健擇組，出現(xiàn)軸索結(jié)構(gòu)消失的改變。順鉑+蓋諾組對(duì)脊髓的損傷要重于單用蓋諾

7、組，出現(xiàn)白質(zhì)脫髓鞘、變性，炎細(xì)胞浸潤等改變。 3．凋亡因子caspase-3及bax，炎癥因子IL-1β，iNOS在脊髓損傷各組均有過表達(dá)，證明上述四種生物因子可能參與了脊髓損傷。尤其是在化療聯(lián)合放射治療各組中caspase-3、Bax、IL-1β及iNOS陽性表達(dá)較單純放療組、單純化療組更強(qiáng)，證明放化聯(lián)合治療對(duì)脊髓損傷更加嚴(yán)重。 4．盡管順鉑、健擇、蓋諾對(duì)放療有增敏作用，能增加腫瘤放射敏感性，提高治療效果。但是它們能增