DNA assembler技術在順,順-己二烯二酸和Siderophere生物合成中的應用.pdf

1、第一部分:
　　二元羧酸順，順-己二烯二酸因其作為平臺化合物來生產一些諸如尼龍6，6，聚氨酯（通過中間體己二酸）以及聚對苯二甲酸乙二酯（通過對苯二甲酸）等有價值的生物塑料的潛在價值而引起人們的極大興趣。這里我們用釀酒酵母來生產順，順-己二烯二酸。通過將來自Klebsiella pnemoniae的3-脫氫莽草酸脫水酶，來自K.pnemoniae.的原兒茶酸脫羧酶以及來自Acinetobacter baylyi的鄰苯二酚1，2-雙加

2、氧酶基因導入到酵母中來構建合成路徑。因PCA脫羧酶是合成中的限速步驟，本實驗嘗試將連接有篩選標記(G418)的PCA脫羧酶基因(AroY)通過酵母轉化將其整合到染色體的δ序列上，通過多輪轉化提高G418的篩選濃度來提高PCA脫羧酶在染色體上的拷貝數(shù)，最終得到一整合基因拷貝數(shù)約為9的菌株，順，順-己二烯二酸的產率提高約為76％，產量可達272mg/L。
　　第二部分:
　　“高鐵霉素”是一類結構中含有“鐵螯合物”的作用機制獨特

3、的抗生素。其中的“鐵螯合物”可靶向細菌中特定的鐵轉運系統(tǒng)，輔助抗生素分子以主動運輸?shù)姆绞礁咝мD運進入菌體，使抗生素作用效能顯著提高。Albomycin由鏈霉菌產生，是“高鐵霉素”家族中的典型代表，帶有鐵色素類的“鐵螯合物”。本研究在基本獲得Albomycin的生物合成基因簇的基礎上，利用DNAassembler技術構建鐵色素的生物合成路徑，在S.lividans TK64中進行異源表達來合成鐵色素。
　　第三部分:
　　具光

4、學活性的氨基酸已被廣泛用于合成抗生素，抗真菌藥，殺蟲劑和甜味劑。其中D-對羥基苯甘氨酸尤其重要，可用于合成羥氨芐青霉素、頭孢拉定等抗菌藥物，成為國內最緊缺的醫(yī)藥中間體之一。它可從DL-苯海因通過D-海因酶和N-氨甲?；饷傅膬刹酱呋伞榱耸蛊涓哂泄I(yè)應用價值，我們首次將這兩個酶與兒丁質結合結構域融合異源表達于大腸桿菌中，并從中分離得到具催化活性的可溶蛋白，實現(xiàn)“一步酶”法合成D-對羥基苯甘氨酸。此外，嘗試將其固定于幾丁質上，使酶