受精蛋與非受精蛋在孵化條件下抗菌活性的初步研究.pdf

1、孵化條件下禽蛋的抗菌問題研究較少，國(guó)內(nèi)外一般只對(duì)受精蛋在孵化過程中的理化性質(zhì)和物質(zhì)交換進(jìn)行研究。為了探明受精蛋在孵化條件下的抑菌機(jī)制，本文采用浸泡接種法對(duì)受精蛋與非受精蛋在孵化條件下抗菌性質(zhì)的變化進(jìn)行了比較分析。并且分別對(duì)分離的受精蛋與非受精蛋蛋清、蛋殼與殼膜在孵化條件下抗菌性的變化進(jìn)行了比較。另外對(duì)在孵化條件下受精蛋與非受精蛋蛋清中兩種主要的抗菌蛋白（溶菌酶、卵轉(zhuǎn)鐵蛋白）含量的變化進(jìn)行了比較研究。
　　 本研究對(duì)不同孵化階段，

2、受精蛋與非受精蛋抗腸炎沙門氏菌的能力進(jìn)行了比較研究。利用1×105 cfu/mL Salmonella Enteritidis(SE)菌懸液接種受精蛋和非受精蛋，測(cè)定在不同孵化時(shí)間蛋殼與殼膜、蛋清、蛋黃的SE的侵染比例。結(jié)果表明：孵化4d，受精蛋蛋殼與殼膜、蛋清比非受精蛋抗腸炎沙門氏菌活性強(qiáng)(P＜0.05)，兩種蛋的蛋黃樣本都未受到侵染；孵化8、12d，兩種蛋的三個(gè)部位樣品腸炎沙門氏菌的陽性比例沒有顯著性差異(P＞0.05)；孵化17d

3、，受精蛋蛋殼與殼膜、蛋黃抗腸炎沙門氏菌活性顯著高于非受精蛋(P＜0.05)，此時(shí)受精蛋雞胚的漂洗物腸炎沙門氏菌陽性率為13.78％，非受精蛋蛋清腸炎沙門氏菌陽性率為45.16%。通過測(cè)定孵化過程中受精蛋與非受精蛋蛋清干重以及含水量的變化，發(fā)現(xiàn)蛋清在孵化過程中被濃縮，且受精蛋蛋清的濃縮作用更大。同時(shí)測(cè)定了蛋清在孵化過程中pH的變化，發(fā)現(xiàn)受精蛋蛋清pH由孵化初期的8.94，在孵化2d時(shí)升至9.30，然后逐漸降低降至8.40，非受精蛋蛋清pH

4、逐漸變大，由孵化初期的9.22升至9.69。蛋清pH的變化限制了SE在蛋清中的生長(zhǎng)。
　　 以孵化后的受精蛋與非受精蛋蛋清為介質(zhì)，對(duì)其抗菌活性進(jìn)行了比較。發(fā)現(xiàn)蛋清對(duì)本實(shí)驗(yàn)所用菌株(腸炎沙門氏菌CMCC(B)50041、金黃色葡萄球菌ATCC6538、CP5型金黃色葡萄球菌、大腸桿菌8099、豬霍亂沙門氏菌C78-1）皆具有抑制作用，且不同孵化天數(shù)的受精蛋和非受精蛋蛋清的抑菌活性有差異，同一孵化天數(shù)的受精蛋與非受精蛋蛋清的抑菌活性

5、也具有一定的差異。無論是革蘭氏陽性菌還是革蘭氏陰性菌，受精蛋與非受精蛋蛋清的抑菌性在孵化的第2d最強(qiáng)，之后兩者的抗菌性均逐漸減弱，蛋清對(duì)革蘭氏陽性菌具有更好的殺滅作用。對(duì)于革蘭氏陰性菌來說，受精蛋與非受精蛋蛋清經(jīng)過孵化0、1、2d，受精蛋蛋清與非受精蛋蛋清的抑菌活性基本等同。孵化3、4d時(shí)，受精蛋蛋清的抑菌活性比非受精蛋蛋清弱。對(duì)于革蘭氏陽性菌來說，受精蛋與非受精蛋蛋清經(jīng)過孵化0、1、2、3d，受精蛋蛋清與非受精蛋蛋清的抑菌活性基本等同

6、。孵化4d時(shí)，受精蛋蛋清的抑菌活性比非受精蛋蛋清的強(qiáng)。
　　 孵化4d時(shí)，受精蛋的抗腸炎沙門氏菌的活性高于非受精蛋，而此時(shí)受精蛋蛋清的抗腸炎沙門氏菌的活性弱于非受精蛋蛋清。這說明：孵化前期蛋清并不是主要的抵抗SE侵入的屏障。因此，通過建立蛋殼穿透模型比較孵化前期SE穿透受精蛋與非受精蛋蛋殼與殼膜的能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：受精蛋孵化0d與孵化1-4d的蛋殼與殼膜在抵抗SE穿透能力上具有顯著性差異(P＜0.05)，SE穿透時(shí)間從第0d的81

7、.6h下降到第4d的60.0h。非受精蛋孵化0-4d的蛋殼與殼膜在抵抗SE穿透上不具有顯著性差異(P＞0.05)，蛋殼的平均抑菌時(shí)間變化不大，一直維持在58-63h之間。0-4d，受精蛋蛋殼比非受精蛋蛋殼的抑菌時(shí)間長(zhǎng)19.2、5.4、5.4、6.5、1.2h。
　　 為了進(jìn)一步揭示受精蛋與非受精蛋蛋清抗菌性差異的原因，本研究還采用分光光度法對(duì)蛋清中兩種主要抗菌蛋白在孵化條件下含量的變化進(jìn)行了測(cè)定和比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：孵化過程中，受精

8、蛋與非受精蛋蛋清中溶菌酶的含量先增大后減少，受精蛋蛋清中溶菌酶含量由孵化0d的3.78mg/mL升至最大值5.23mg/mL（孵化2d）。非受精蛋蛋清中溶菌酶的含量由孵化0d時(shí)的3.86mg/mL升至最大值4.71mg/mL(孵化3d)。孵化3、4d時(shí)的受精蛋蛋清中溶菌酶的含量高于非受精蛋蛋清，由于溶菌酶主要作用于革蘭氏陽性菌，說明3-4d時(shí)，受精蛋蛋清的抗革蘭氏陽性菌的能力高于非受精蛋，這與第三章的結(jié)果相吻合。孵化過程中，受精蛋與非受