牛卵細胞體外受精及熱應激條件下IGF-I對其影響的研究.pdf

1、隨著胚胎工程技術的深入研究,牛卵母細胞體外受精技術的應用范圍已越來越廣泛,不僅為牛胚胎移植技術的商業(yè)化發(fā)展提供了更為廉價的胚胎來源,更為研究動物生殖機能、生殖細胞的體內(nèi)發(fā)育機制以及解決現(xiàn)實生產(chǎn)中的外界應激因素對動物生殖機能的影響機制搭建了技術平臺。熱應激(heatstress)是世界范圍內(nèi)普遍存在的、對奶牛生殖力影響較大的環(huán)境因素,而IGF-Ⅰ對胚胎早期發(fā)育則具有顯著的促進作用,但IGF-Ⅰ在牛卵母細胞體外成熟階段的影響作用仍不明確。本

2、研究首先對卵母細胞的體外成熟、體外受精及體外培養(yǎng)過程中的一些影響因素進行了科學實驗,并利用成熟的牛卵母細胞體外受精技術對熱應激(heat shock,HS)影響卵母細胞發(fā)育能力進行了細胞及分子水平的研究,并對引起人們廣泛關注的IGF-Ⅰ在卵母細胞體外成熟前后對卵母細胞發(fā)育能力的影響進行了多個組合的對比研究。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 實驗一、正常體溫條件下牛卵母細胞體外成熟、受精及早期胚胎體外培養(yǎng)技術研究
　

3、　 1)牛卵母細胞體外成熟因素研究
　　 屠宰場獲取卵巢后的卵巢離體保存時間在6h以內(nèi)時對卵母細胞的體外成熟率無影響,超過6h后成熟率下降;獲卵卵泡直徑在2mm以內(nèi)時卵母細胞的體外成熟率較低(51.66±3.15),直徑大于2mm后,盡管成熟率隨卵泡直徑的增加而呈增加趨勢,但卵泡直徑在2-6mm,7-8mm及9-10mm時的卵母細胞成熟率間并無顯著差異(80.73±2.81,84.32±1.85,87.27±6.23,P＞0.

4、05);A、B級COCs的卵母細胞成熟率較高(85.92±3.35vs82.47±3.24,P＞0.05),C級COCs的成熟率顯著下將(60.26±5.46,P＜0.05),D級COCs的成熟率最低(18.23±4.15,P＜0.05)。
　　 2)牛卵母細胞體外受精因素研究
　　 卵泡直徑對卵母細胞體外受精后的卵裂率有較大影響,隨卵泡直徑增加而顯著增加(P＜0.05)。卵泡直徑對囊胚率也有一定影響,當直徑小于2mm時

5、囊胚率僅為6.37±2.58,直徑在2-8mm之間時囊胚率顯著增加(24.73±1.63,28.21±1.89,P＞0.05),直徑在9-10mm的囊胚率顯著高于除7-8mm外的其它各組(31.43±7.49,P＜0.05);體外受精前卵丘細胞完全保留或部分保留對卵裂率及囊胚率均無影響,但完全脫除卵丘細胞使卵裂率及囊胚率顯著降低;精卵共孵育時間在8-18h之間的各時間段間對卵母細胞的發(fā)育能力無影響。
　　 3)牛早期胚胎體外培養(yǎng)

6、因素研究
　　 每24h或48h對胚胎培養(yǎng)液進行半量更換對卵裂率及囊胚率的影響并不顯著,與對照組的結(jié)果無差異,但在胚胎培養(yǎng)的第3天補充10％的FCS對囊胚的發(fā)育具有促進作用。
　　 實驗二、熱應激(HS)條件下IGF-Ⅰ對牛卵母細胞體外發(fā)育能力的影響研究
　　 1)GV期牛卵母細胞在熱應激條件下添加IGF-Ⅰ對其發(fā)育能力的影響
　　 HS條件及IGF-Ⅰ對IVM后卵母細胞胞質(zhì)內(nèi)皮質(zhì)顆粒的分布、核成熟及核凋

7、亡均未產(chǎn)生任何影響。
　　 2)熱應激條件下牛卵母細胞體外成熟時IGF-Ⅰ的添加對其發(fā)育能力的影響
　　 HS顯著降低了IVF后的卵裂率(CvsHS為75.60±3.54.vs56.55±5.24,P＜0.05),并降低了IVF后42h時超過2-細胞胚胎的比率(CvsHS為39.11±5.17vs22.66±4.99,P＜0.05)。但IGF-Ⅰ僅使LCR組中2-細胞胚胎與所有超過2-細胞的胚胎間的比率有降低趨勢(3.4

8、2±0.53％vs1.8±0.53％;P＜0.1);HS及IGF-Ⅰ對IVM后胞質(zhì)內(nèi)皮質(zhì)顆粒的分布未產(chǎn)生任何影響;HS顯著增加了處于MI期卵母細胞的比率(CvsHS為1.75±1.75vs39.34±5.39,P＜0.05),同時降低了MⅡ期卵母細胞的比率(CvsHS為57.9±13.27vs13.91±4.16,P＜0.05)。HS組中處于晚期核成熟階段(TeloⅠ及MⅡ)的卵母細胞比率顯著低于C組(P＜0.01),IGF-Ⅰ在熱應激