厭氧脫色高通量評估體系的構(gòu)建及其應(yīng)用研究.pdf

1、針對目前基于厭氧瓶的微生物降解評估方法效率低、操作繁瑣等缺點，本論文結(jié)合96孔板的高通量特性及酶標儀的自動檢測功能，利用染料充當電子受體和指示劑，構(gòu)建了一種新型的厭氧脫色高通量無損評估體系。利用此體系評估了c型細胞色素CymA在模式產(chǎn)電微生物Shewanella oneidensis MR-1胞外呼吸中的作用，以及S.oneidensis MR-1對不同偶氮染料的胞內(nèi)外降解特性。論文主要研究內(nèi)容如下:
　　(1)基于96孔板與酶標

2、儀，構(gòu)建生物厭氧脫色高通量評估體系。在96孔板中，將待評測微生物菌株接種于含染料污染物的脫色培養(yǎng)基中，并于厭氧條件下密封培養(yǎng)。以酶標儀作為自動檢測器，對染料濃度變化進行實時無損監(jiān)測。利用該體系評估了S.oneidensis MR-1野生型及Mtr通路蛋白缺失型突變體(△mtrA、△mtrB、△mtrC/omcA以及△cymA)對指示性偶氮染料甲基橙的厭氧脫色效能，驗證了所構(gòu)建的高通量無損評估體系具有可行性。
　　(2)探討了Cym

3、A在S.oneidensis MR-1胞外電子跨膜傳遞中的作用。針對目前CymA對Mtr電子跨膜傳遞通路的作用研究中所存在的爭論，本論文以S.oneidensis MR-1及Mtr通路蛋白缺失型突變體為研究對象，以染料苯胺藍和甲基橙作為胞外呼吸的電子受體，證實了CymA對Mtr通路的重要性受胞外電子受體種類、電子受體濃度以及胞外電子傳遞速率等因素的影響。這些因素本質(zhì)上影響的是CymA到Mtr通路的電子傳遞，CymA的重要性也隨Mtr通路

4、對其電子傳遞需求的增加而加大。
　　(3)評估了Mtr通路對偶氮染料的胞內(nèi)、胞外降解脫色效能。利用兩種結(jié)構(gòu)不同的偶氮染料甲基紅和莧菜紅進行S.oneidensis MR-1降解的評估。結(jié)果表明，甲基紅主要是胞內(nèi)降解，Mtr通路對其降解影響作用較小。而莧菜紅則因為分子極性較大難進入細胞，主要依賴于Mtr通路跨膜傳遞的電子進行還原，其降解受Mtr通路的影響較大。胞外電子遞質(zhì)核黃素對甲基紅的胞內(nèi)降解無顯著影響，卻能加速莧菜紅的降解。電子