免疫層析快速檢測呋喃唑酮代謝物的方法研究.pdf

1、免疫層析試紙條具有特異性強、靈敏度高、方法簡捷、分析容量大、檢測成本低等優(yōu)點，定性檢測不需要儀器輔助，且樣品前處理步驟簡單方便，非常適合現場檢測，并且可以提供系列化的產品以及技術產品可以商業(yè)化，不僅為檢測行業(yè)提供幫助，并能為社會創(chuàng)造經濟價值。
　　本課題研究設計了兩種免疫層析快速檢測試紙條，分別用金磁復合微粒和CdTe量子點代替膠體金標記AOZ單抗，結合了納米標記技術與免疫層析技術，通過金磁微球標記和CdTe QDs熒光標記抗體，

2、與同等膠體金標記相比，提高了靈敏度，在定性分析中，前者可直接通過裸眼判斷，后者通過便攜式紫外燈照射，在定量分析中，前者可通過磁性號分析儀，后者通過熒光讀數儀可分別讀取層析載體上三維的磁性號和熒光信號，直接得到信號值，通過建立標準曲線，定量檢測值。
　　本課題中制備了粒徑均一、分散性好的多層金磁復合微粒，并成功與AOZ單克隆抗體進行偶聯，探索到最佳偶聯條件為:pH為7.4的環(huán)境下，1mg金磁復合微粒表面偶聯AOZ-McAb的最佳含量

3、為170μg，投入抗體含量480μg，偶聯率為35.43％，用含5％BSA，pH=7.4的Pbs的封閉劑封閉50min，最后探針保存于含0.2％BSA、2％蔗糖、0.8％Triton-Ⅹ-100、0.05％PVP、0.2％Tween-20、0.02％NaN3的Pbs中。可為其他抗體的磁微粒標記提供參考。并對層析墊上材料進行了優(yōu)選，包括硝酸纖維素膜、樣品墊和結合墊，分別選用Satorius CN140、GL-b02、Ahlstrom896

4、4;并對樣品墊及結合墊處理液進行了探究實驗，分別將含0.5％BSA、2％曲拉通、0.2％NaCl、2％PVP的超純水溶液作為最佳樣品墊處理液及含1％蔗糖、0.2％曲拉通、0.2％Tween-20的超純水溶液作為最佳結合墊處理液;將以上所得物成功組裝成AOZ金磁免疫層析試紙條，并對該試紙條的性能進行了評估，該試紙條靈敏度為8ng/mL，與硝基呋喃類代謝物無交叉反應，特異性較好、重復性佳，常溫保存一年，4℃可保存長達2年，穩(wěn)定性優(yōu)良。

5、>　　本課題中制備了粒徑均一、分散性好，量子產率高達42.3％的高量子產率熒光CdTe QDs，具有良好的光譜性能的可作為標記抗體的優(yōu)良熒光材料;優(yōu)選了量子點溶液的純化方案，即丙酮沉淀法優(yōu)于透析純化，對量子點的處理具有較高的參考價值;對熒光探針的偶聯條件進行了優(yōu)化，選擇反應50min作為CdTe-AOZ-McAb探針的最佳偶聯時間及AOZ-McAb最佳使用量為QDs與AOZ-McAb之比為1∶0.75。得到具有優(yōu)良光譜性能的熒光探針，為

6、其他熒光材料標記抗體提供可行性偶聯方法參考;對層析墊上材料進行了優(yōu)選，包括硝酸纖維素膜、樣品墊和結合墊，分別選用Millipore135、GL-b02、Ahlstrom8964。在以上條件下成功制得AOZ熒光免疫層析試紙條，并對該試紙條的性能進行了評估，靈敏度為5ng/mL，與硝基呋喃類代謝物沒有交叉反應，特異性較好、重復性及穩(wěn)定性優(yōu)良。
　　作為以上兩種試紙條的對比，本研究制備了AOZ金標試紙條。采用最佳試紙條材料及處理方法處理