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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
探索短乳桿菌DM9505對(duì)高果糖(High Fructose,HF)誘導(dǎo)的高尿酸血癥模型小鼠的影響,為益生菌制劑的開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。
方法:
1、分組與造模
本實(shí)驗(yàn)將Balb/c雄性小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(Control),高果糖模型組(HF)和益生菌干預(yù)組(Probiotic),每組15只。模型組和益生菌干預(yù)組小鼠同時(shí)給予15%(w/v)的高果糖水自由飲用,益生菌干預(yù)組同時(shí)予以短乳桿菌D
2、M9505灌胃(1×109cfu/kg,0.2ml/天)處理,正常對(duì)照組給予自來(lái)水自由飲用。
2、DM9505對(duì)高果糖喂養(yǎng)小鼠尿酸生成的果糖代謝機(jī)制的影響
每天觀察記錄各組小鼠的飲食及活動(dòng)狀態(tài),每一周測(cè)定各組小鼠的體重和血糖,實(shí)驗(yàn)第8周后處死所有小鼠。用酶法試劑盒檢測(cè)各組小鼠血清樣本的血尿酸(Serum uric acid,UA)、血脂全套指標(biāo)。將小鼠肝臟組織切片并進(jìn)行HE染色,觀察肝臟組織的病理改變;肝臟組織進(jìn)行勻
3、漿,用ELISA方法檢測(cè)各組小鼠肝臟組織中三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate,ATP)、單磷酸腺苷(Adenosine Monophosphate,AMP)、肌苷(Inosine)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factorβ1,TGF-β1)和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的變化以及小鼠糞便Inosine水平;用RT-qPCR方法檢測(cè)各組小鼠肝臟組
4、織中NOX4mRNA表達(dá)水平的變化。
3、DM9505對(duì)高果糖喂養(yǎng)小鼠尿酸生成的調(diào)節(jié)機(jī)制的影響
將肝臟組織進(jìn)行勻漿,用ELISA方法檢測(cè)各組小鼠肝臟組織中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)、干擾素α(Interferonα,IFN-α)、黃嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,XOD)濃度和XOD活性的變化;用RT-qPCR方法檢測(cè)各組小鼠肝臟組織中XODmRNA表達(dá)水平的變化。
5、 4、DM9505對(duì)高果糖誘導(dǎo)的高血尿酸小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用
提取各組小鼠結(jié)腸內(nèi)容物DNA,使用PCR-DGGE方法和切膠測(cè)序方法鑒定小鼠腸道菌群變化特點(diǎn),并應(yīng)用Illuminate Hiseq PE25016SrDNA測(cè)序分析技術(shù)對(duì)各組小鼠腸道菌群進(jìn)行組間物種差異分析、生物分類(lèi)學(xué)上的比較、Beta多樣性分析、Alpha多樣性分析和CCA分析。
結(jié)果:
1、DM9505對(duì)高果糖喂養(yǎng)小鼠尿酸生成的果糖代謝機(jī)
6、制的影響
各組小鼠體重和血糖在實(shí)驗(yàn)一周后持續(xù)上升。實(shí)驗(yàn)8周后,模型組與正常對(duì)照組間,體重和血糖明顯升高(P<0.05),同時(shí)UA、TG、TC等基礎(chǔ)指標(biāo)也顯著增加(P<0.05);而經(jīng)益生菌干預(yù)后,除小鼠UA水平明顯降低外(P<0.05),其他各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)明顯改善。
高果糖模型組小鼠肝臟組織中的AMP、Inosine、TGF-β1、NOX4mRNA、ROS及糞便中Inosine的表達(dá)量均比正常對(duì)照組明顯上升(P<0.0
7、5),而ATP水平明顯降低(P<0.05);經(jīng)過(guò)益生菌干預(yù)后,除ATP、AMP含量無(wú)明顯變化外,小鼠其他各物質(zhì)的表達(dá)水平均有不同程度的下降(P<0.05)。各組小鼠肝臟組織HE染色觀察發(fā)現(xiàn),與正常對(duì)照組相比,高果糖模型組小鼠肝臟細(xì)胞腫脹膨大明顯;而益生菌組小鼠肝細(xì)胞形態(tài)改變有所改善。
2、DM9505對(duì)高果糖喂養(yǎng)小鼠尿酸生成的調(diào)節(jié)機(jī)制的影響
高果糖模型組小鼠肝臟組織中的LPS、IFN-α、XOD濃度、XOD活性以及X
8、ODmRNA的表達(dá)水平均比正常對(duì)照組明顯升高(P<0.05),而經(jīng)過(guò)益生菌干預(yù)后,各組小鼠的LPS、IFN-α、XOD濃度、XOD活性及XODmRNA表達(dá)水平均明顯降低(P<0.05)。
3、DM9505對(duì)高果糖誘導(dǎo)的高血尿酸小鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用
PCR-DGGE的凝膠成像圖顯示,高果糖模型組小鼠的腸道菌群與正常對(duì)照組小鼠的腸道菌群數(shù)量和結(jié)構(gòu)之間存在著明顯差異:兩組之間存在許多差異條帶,且模型組小鼠的腸道菌群條帶數(shù)
9、與正常組小鼠相比明顯減少。條帶切膠測(cè)序結(jié)果顯示模型組小鼠條件致病菌增加,而益生菌干預(yù)組有益菌增加。
各組小鼠結(jié)腸內(nèi)容物16SrDNA高通量測(cè)序結(jié)果顯示。與正常對(duì)照組相比,模型組的菌種數(shù)量和菌群多樣性明顯較低;UPGMA聚類(lèi)樹(shù)顯示,益生菌干預(yù)組與正常對(duì)照組離得更近,相似性更大;模型組與正常組和益生菌干預(yù)組離得遠(yuǎn),相似性較低。
模型組與正常對(duì)照組相比:擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)細(xì)菌減少,而變形菌門(mén)(Prote
10、obacteria)的真桿菌(Eubacterium)、脫硫弧菌屬(Desulfovibrio)及腸球菌(Enterococcus)細(xì)菌增多,以上結(jié)果表明高果糖模型小鼠的腸道菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變,其正常菌群減少而條件致病菌增加。
益生菌干預(yù)組小鼠腸道菌群與模型組小鼠相比:擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)細(xì)菌水平明顯比模型組多,厭氧棍狀菌屬(Anaerotruncus)增加;而厚壁菌門(mén)(Firmicutes)細(xì)菌及變形菌門(mén)的
11、糖桿形菌屬(Saccharibacteria)減少。以上結(jié)果顯示,益生菌干預(yù)組小鼠腸道正常菌群增加,而條件致病菌減少了。
結(jié)論:
1、短乳桿菌DM9505一方面可調(diào)果糖代謝中間產(chǎn)物-Inosine的水平;另一方面可影響LPS、IFN-α的濃度刺激XOD的表達(dá)及其濃度與活性,這些均可改善高果糖飲食誘導(dǎo)的小鼠高尿酸血癥。
2、短乳桿菌DM9505可在一定程度上調(diào)整高果糖誘導(dǎo)的小鼠腸道菌群紊亂,特別是能使正常菌群
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