益生菌對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及機(jī)制.pdf

1、第一章：益生菌對原發(fā)性高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及機(jī)制
　　目的：檢測原發(fā)性高尿酸血癥發(fā)生時(shí)腸道乳酸桿菌和雙歧桿菌的變化，以及益生菌治療對原發(fā)性高尿酸血癥血清尿酸水平及腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)的影響及機(jī)制。
　　方法：1.構(gòu)建尿酸氧化酶（Uricase, Uox）基因敲除的C57BL/6小鼠原發(fā)性高尿酸血癥模型，采用Real-time PCR及Western-blot技術(shù)方法對該模型的敲除效率進(jìn)行驗(yàn)證；

2、2.實(shí)驗(yàn)小鼠分為4組（每組12只）。正常組：正常對照C57BL/6小鼠，每天灌胃0.2ml生理鹽水；高尿酸組：Uox基因敲除的原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠，每天灌胃0.2ml生理鹽水；正常組+益生菌組（益生菌N組）：正常C57BL/6小鼠每天灌胃益生菌（分別含雙歧桿菌和乳酸桿菌1.0×106 CFU，溶解于0.2ml生理鹽水）；高尿酸組+益生菌組（益生菌H組）：Uox基因敲除的原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠每天灌胃益生菌（分別

3、含雙歧桿菌和乳酸桿菌1.0×106 CFU，溶解于0.2ml生理鹽水）。3.提取各組小鼠糞便樣本中總DNA，基于16S rRNA設(shè)計(jì)特異性引物，絕對定量RT-PCR法檢測腸道菌群特別是乳酸桿菌及雙歧桿菌的變化；采用全自動(dòng)生化儀及相關(guān)檢測試劑盒檢測各組小鼠血清尿酸（Uric Acid, UA）、內(nèi)毒素（Lipopolysaccharides, LPS）以及黃嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase, XO）的活性水平；采用RT-PCR

4、及Western-blot法檢測各組小鼠腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP mRNA及蛋白表達(dá)變化；采用酶比色法檢測腸道菌群對尿酸的分解水平。在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第0、7、14、21、28及35天檢測上述指標(biāo)。4.采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：與正常組比較，高尿酸組小鼠腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量明顯下降（P＜0.05）。血清尿酸、內(nèi)毒素以及黃嘌呤氧化酶活性水平明顯升高(P＜0.01)。腸道菌群對尿酸的分解水平顯著

5、降低（P＜0.05）。腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)顯著增加（P＜0.05）。益生菌N組腸道中雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量明顯升高（P＜0.05），其余指標(biāo)未見顯著差異。
　　與高尿酸組比較，益生菌H組腸道中雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量明顯增加（P＜0.05）。血清尿酸、內(nèi)毒素以及黃嘌呤氧化酶活性水平明顯降低（P＜0.01），但數(shù)值仍高于正常組（P＜0.05）。腸道菌群對尿酸的分解水平顯著升高（P＜0.05），腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白AB

6、CG2/BCRP表達(dá)水平未見顯著差異。
　　結(jié)論：1. Uox基因敲除成功建立原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型，原發(fā)性高尿酸血癥模型鼠腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量減少。2.益生菌干預(yù)治療改變原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型腸道菌群的結(jié)構(gòu)，使腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量增加。3.益生菌干預(yù)治療使原發(fā)性高尿酸血癥C57BL/6小鼠模型血清內(nèi)毒素和黃嘌呤氧化酶活性水平降低，進(jìn)而尿酸生成減少，血清尿酸水平降低；4.原發(fā)性高尿酸血

7、癥C57BL/6小鼠模型尿酸腸道轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)水平代償性增加。益生菌干預(yù)治療并未進(jìn)一步上調(diào)ABCG2/BCRP的表達(dá)，但可增加尿酸在腸道中的分解，進(jìn)而尿酸腸道排泄增加，血清尿酸水平降低。
　　第二章：益生菌對輪狀病毒感染導(dǎo)致的繼發(fā)性高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響及機(jī)制
　　目的：兒童輪狀病毒（rotavirus，RV）腸胃炎（gastro-enteritis，GE）發(fā)生時(shí)，可能會(huì)伴隨高尿酸血癥。因此，我們

8、建立RV GE小鼠模型,進(jìn)而檢測血清尿酸（Uric Acid，UA）水平，以及腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP的表達(dá)變化。同時(shí)，應(yīng)用益生菌乳酸桿菌及雙歧桿菌治療RV GE小鼠，進(jìn)一步觀察血清尿酸以及腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP的表達(dá)變化。
　　方法：通過灌胃RV建立RV GE小鼠模型。日齡為3天的小鼠隨機(jī)分為4組：正常組，RV GE組，益生菌N組及益生菌RV組。RV GE組及益生菌RV GE組給予灌胃0.2 ml含RV

9、培養(yǎng)液（2×108 PFU），正常組及益生菌N組給予不含病毒的培養(yǎng)液灌胃0.2 ml。益生菌N組及益生菌RV GE組給予灌胃0.2 ml培養(yǎng)液后，同時(shí)每天給予益生菌灌胃治療（分別含雙歧桿菌和乳酸桿菌1.0×106 CFU，溶解于0.1 ml生理鹽水），正常組及RV GE組每天灌胃0.1 ml生理鹽水。采用全自動(dòng)生化儀檢測各組小鼠血清尿酸。采用RT-PCR法檢測各組小鼠腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP的mRNA表達(dá)變化。在實(shí)驗(yàn)灌胃RV

10、后第1、2、3、4、5、6、7、10天檢測上述指標(biāo)。結(jié)果：與正常組比較，RV GE組及益生菌RV組血清尿酸水平在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第2,3,4,5,6,7天顯著升高（P＜0.01），益生菌N組血清尿酸水平未見明顯差異；與RV GE組比較，益生菌N組血清尿酸水平在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第2,3,4,5,6,7天顯著降低（P＜0.01），益生菌RV組血清尿酸水平實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第3,4,5,6,7,10天顯著降低（P＜0.05），但數(shù)值在各時(shí)間點(diǎn)仍高于正常組。
　　

11、與正常組比較，RV GE組腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP mRNA表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第3,4,5,6,7,10天顯著降低（P＜0.05），益生菌N組ABCG2/BCRP mRNA表達(dá)水平未見明顯差異，益生菌RV組在個(gè)時(shí)間點(diǎn)ABCG2/BCRP mRNA表達(dá)水平降低，在實(shí)驗(yàn)第2,3,4天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與RV GE組比較，益生菌N組ABCG2/BCRP mRNA表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第3,4,5,6,7,10天顯著升高

12、（P＜0.05），益生菌RV組ABCG2/BCRP mRNA表達(dá)水平在各時(shí)間點(diǎn)升高，在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行第3,4,5,6,7,10天差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但數(shù)值在各時(shí)間點(diǎn)仍低于正常組。
　　結(jié)論：1. RV灌胃成功建立了輪狀病毒感染小鼠模型。2.輪狀病毒感染小鼠模型血清尿酸水平增加。3.輪狀病毒感染小鼠腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)下降。4.益生菌增加輪狀病毒感染小鼠腸道尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG2/BCRP表達(dá)，降低了模