一型糖尿病血清miRNAs的生物標(biāo)記物研究.pdf

1、第一部分：血清miRNAs在胰島自身抗體陽性人群中的表達(dá)及臨床意義的研究
　　目的：本實(shí)驗(yàn)旨在一型糖尿病自身抗體陽性家屬中探索一型糖尿病的早期血清miRNAs生物標(biāo)記物。
　　實(shí)驗(yàn)方法：我們用85個胰島自身抗體陽性的一型糖尿病家屬和79個胰島自身抗體陰性的一型糖尿病家屬作為研究對象。研究對象的血清標(biāo)本來自美國一型糖尿病預(yù)防隊(duì)列研究（Diabetes Prevention Trial, Type1 diabetes, DPT-

2、1）。通過Taqman microarray初步檢測754個MiRNAs的表達(dá)量，篩選出候選miRNA。差異表達(dá)的候選MiRNAs進(jìn)一步采用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測并驗(yàn)證其表達(dá)量。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，胰島自身抗體陽性和陰性的群體相比，miR-548a-3p, miR-184, miR-200a

3、, miR-374b, miR-518f, miR-561, miR-574-3p, miR-197和 miR-146a在胰島自身抗體陽性的群體的血清中表達(dá)明顯下調(diào)。然而miR-30c表達(dá)明顯上調(diào)(p值＜0.05). MiRNAs組合(miR-146a, miR-197, miR-193b, miR-574-3p, and miR-561)可以更好地（高特異性和高敏感型）區(qū)分胰島自身抗體陽性和陰性群體。
　　結(jié)論：我們發(fā)現(xiàn)單個mi

4、RNA或五個miRNAs組合與胰島素自身抗體的密切相關(guān)性，能夠作為生物標(biāo)記物對一型糖尿病家屬的胰島自身抗體進(jìn)行篩查和診斷，為臨床一型糖尿病的早期預(yù)測提供有效依據(jù)。
　　第二部分：血清miRNAs在一型糖尿病人群中的表達(dá)及臨床意義的研究
　　背景：一型糖尿?。═1D）是T細(xì)胞介導(dǎo)的β細(xì)胞受損的自身免疫性疾病，其發(fā)病率每年以3-4%的速率增加。T1D診斷時90%的β細(xì)胞已經(jīng)喪失功能，此時 T1D的高危人群失去了早期預(yù)防的機(jī)會。因

5、此急需一種新的生物標(biāo)記物有助于早期診斷T1D并用于監(jiān)測T1D的自身免疫進(jìn)展。miRNAs是很多生理病理過程的重要調(diào)節(jié)者，并且作為很多疾病的標(biāo)記物。我們前期研究發(fā)現(xiàn)T1D的小鼠血清的miRNAs可以作為T1D疾病進(jìn)展的重要標(biāo)記物。我們進(jìn)一步在胰島自身抗體陽性的人群中驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)血清miRNAs可以預(yù)測胰島自身抗體。本實(shí)驗(yàn)在前期研究基礎(chǔ)上，進(jìn)一步在T1D人群中研究血清miRNAs,旨在探索一型糖尿病的早期血清miRNAs生物標(biāo)記物。
　

6、　實(shí)驗(yàn)方法：我們用107個新發(fā)T1D病人和106個胰島自身抗體陽性的一型糖尿病親屬作為研究對象。研究對象的血清標(biāo)本來自美國一型糖尿病預(yù)防隊(duì)列研究（Diabetes Prevention Trial, Type1 diabetes, DPT-1）。通過Taqman microarray初步檢測754個MiRNAs的表達(dá)量，篩選出候選miRNA。差異表達(dá)的候選MiRNAs進(jìn)一步采用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-t

7、ime polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測并驗(yàn)證其表達(dá)量。采用TargetScan, miRBase，polymiRTS和T1dbase分析預(yù)測miRNAs的靶基因及生物信息功能
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：qRT-PCR檢測結(jié)果顯示，T1D病人與胰島自身抗體陽性非糖尿病人群相比，三個血清miRNAs(hsa-miR-218, hsa-miR-381和 hsa-miR-618表達(dá)明顯上調(diào)(兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，

8、p值＜0.05)。這些miRNAs與胰島β細(xì)胞的凋亡及一型糖尿病發(fā)病機(jī)制的相關(guān)通路有關(guān)。線性回歸分析發(fā)現(xiàn)，miR-218表達(dá)水平與T1D病人的空腹C-肽水平負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步在新診斷T1D人群中分析miRNAs與C肽水平的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)26個miRNAs水平與C肽濃度相關(guān)，可能參與了β細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)。
　　結(jié)論：我們發(fā)現(xiàn)miR-218在新發(fā)T1D病人的血清中表達(dá)水平升高，而且血清miR-218表達(dá)水平與與胰島β細(xì)胞的受損過程相關(guān)。miR-