雪菊總黃酮降血脂作用及其機(jī)制研究.pdf

1、雪菊是我國新疆地區(qū)常用維藥，具有清熱解毒、化濕止痢的功效，維吾爾族人將其作為茶飲并用來預(yù)防心血管疾病?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，雪菊具有降糖、降脂、降壓的功效，主要活性成分為黃酮類化合物，但在降血脂作用方面研究較薄弱。本課題前期研究表明，雪菊總黃酮具有明確的降低血脂作用。本文在此工作基礎(chǔ)上，對雪菊總黃酮及其中主要成分進(jìn)行定性和定量分析，對其體外降低甘油三酯作用及其機(jī)制進(jìn)行研究，初步闡釋雪菊總黃酮降血脂的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制。雪菊藥材釆用75

2、％乙醇加熱回流提取、AB-8大孔樹脂柱精制獲得雪菊總黃酮（CTE）；CTE經(jīng) LX2000樹脂、C18反相硅膠、Sephadex LH-20凝膠等柱層析技術(shù)分離純化得到4個化合物，經(jīng) UV、MS、NMR等波譜技術(shù)鑒定為黃諾瑪苷、異奧卡寧、馬里苷和奧卡寧。采用高效液相色譜雙波長分析法，首次建立了同時測定雪菊中該4個指標(biāo)性成分含量的方法。色譜條件：Agilent1260高效液相色譜儀；Cosmosil5C18-AR-Ⅱ色譜柱（250mm×4

3、.6mm，5μm）；流動相為乙腈（A）-0.1%乙酸溶液（B）梯度洗脫，0～20min，16%A，20～35 min，16%～25%A，35~45min，25%-90%A；流速1.0ml/min；檢測波長280nm（1和2）和378nm（3和4）。測定CTE中黃諾瑪苷、異奧卡寧、馬里苷和奧卡寧的含量依次為64.31 mg·g-1、20.54 mg·g-1、114.3 mg·g-1和16.64 mg·g-1。采用 LC/MS/MS分析，進(jìn)

4、一步對雪菊總黃酮中的9種黃酮類成分進(jìn)行了歸屬。上述分析方法快速、準(zhǔn)確，可為雪菊的質(zhì)量控制方法提供參考。
　　本研究采用人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，考察雪菊總黃酮和馬里苷、黃諾瑪苷對油酸誘導(dǎo)的脂肪變性 HepG2細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝的影響。實(shí)驗(yàn)分為正常組，模型組，CTE（3.75、7.5、15μg/mL）組，馬里苷（0.0125、0.025、0.05μmol/mL）組，黃諾瑪苷（0.025、0.05、0.1μmol/mL）組，

5、陽性藥非諾貝特（200μg/mL）組。各組細(xì)胞培養(yǎng)24h后，測定各組細(xì)胞內(nèi)甘油三酯（TG）、細(xì)胞和上清液中游離脂肪酸（FFA）含量；采用Western-Blot法檢測細(xì)胞內(nèi)過氧化物酶體增殖物激活α受體（PPARα）、二脂酰甘油?；D(zhuǎn)移酶（DGAT）和肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶1A（CPT1A）蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示：（1）與正常組比較，油酸造模組細(xì)胞內(nèi) TG和 FFA及細(xì)胞上清液中 FFA含量明顯升高（P<0.01）；與模型組比較，雪菊總黃酮

6、（7.5μg/mL、15μg/mL）和馬里苷（0.025μmol/mL即11.25μg/mL，0.05μmol/mL即22.45μg/mL）可降低細(xì)胞內(nèi)TG和FFA及細(xì)胞上清液中 FFA的含量（P<0.01或P<0.05），并呈一定的劑量依賴趨勢；黃諾瑪苷（0.025、0.05、0.1μmol/mL）未觀察到該作用。油紅 O染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果與該結(jié)果一致。（2）Western-Blot檢測結(jié)果顯示，雪菊總黃酮（7.5μg/mL、15μg/mL