Ti表面構(gòu)建肝素—纖維蛋白-VEGF生物功能層及抗凝-誘導(dǎo)內(nèi)皮化評(píng)價(jià).pdf

1、心血管疾病介入治療中，血管支架內(nèi)再狹窄問題是影響支架療效的重要原因之一。再狹窄主要是由血栓形成、組織異常增生及平滑肌遷移引起的。血管支架等與血液長期接觸的材料，必須具備良好的血液相容性。有研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞是與血液接觸的最理想表面。因此，支架植入表面快速內(nèi)皮化是必不可少的。目前研究的熱點(diǎn)是，植入生物功能化的材料以捕獲血液中的內(nèi)皮祖細(xì)胞，使其分化為自體的內(nèi)皮細(xì)胞。
　　本文利用靜電吸附作用將肝素、纖維連接蛋白(Fn)、VEGF固定于

2、氨基化的鈦表面，期望得到抗凝血/誘導(dǎo)內(nèi)皮化的生物功能層。
　　通過堿活化使鈦表面產(chǎn)生大量呈負(fù)電性的羥基反應(yīng)基團(tuán)，再靜電吸附聚賴氨酸生物過渡層以獲得帶有大量氨基的正電荷表面。然后，利用靜電吸附及生物分子間的特異性識(shí)別作用，將肝素、Fn及VEGF固定于氨基化的表面，構(gòu)建Hep/Fn/VEGF生物功能層。FTIR結(jié)果表明，Ti經(jīng)堿活化后表面帶有大量-OH，靜電吸附PLL后得到富含-NH2的表面;XPS、甲苯胺藍(lán)定量肝素及免疫組化結(jié)果表明

3、，已成功將生物分子固定在氨基化的Ti表面，構(gòu)建了Hep/Fn/VEGF生物功能層;AFM、水接觸角結(jié)果表明，與Ti相比，固定生物分子后表面粗糙度減小，且親水性增強(qiáng)。肝素釋放結(jié)果表明，樣品表面固定的肝素在釋放12h后出現(xiàn)突釋，但隨著時(shí)間的延長，釋放得越來越緩慢;VEGF釋放結(jié)果表明VEGF在28d的釋放過程中釋放得越來越緩慢，這些結(jié)果說明雖然本文采用靜電吸附作用構(gòu)建生物功能層，但生物功能層具有一定的穩(wěn)定性。
　　體外血液相容性評(píng)價(jià)結(jié)

4、果表明，與Ti表面相比，Hep/Fn/VEGF生物功能層具有較好的ATⅢ結(jié)合活性，能有效抑制血小板粘附與激活，延長凝血時(shí)間;纖維蛋白原粘附及變性比Ti增多，但變性比例較Ti明顯降低，表明Hep/Fn/VEGF生物功能層具有良好的抗凝血性能。
　　體外細(xì)胞相容性評(píng)價(jià)結(jié)果表明，與Ti表面相比，Hep/Fn/VEGF生物功能層能顯著促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞的粘附及增殖，在一定程度上抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，同時(shí)還能抑制平滑肌細(xì)胞增殖。體外誘導(dǎo)內(nèi)

5、皮化結(jié)果表明，Hep/Fn/VEGF生物功能層能較好的促進(jìn)內(nèi)皮祖細(xì)胞趨化及內(nèi)皮細(xì)胞遷移。這些結(jié)果說明生物功能層具有良好的細(xì)胞相容性及誘導(dǎo)內(nèi)皮化能力。
　　對(duì)材料表面性質(zhì)、生物分子的引入及生物分子間相互競爭與平衡作用對(duì)材料表面生物相容性的影響機(jī)理進(jìn)行了探討。適當(dāng)提高表面親水性及納米尺寸的粗糙度有利于改善材料表面生物相容性。通過肝素、Fn和VEGF在材料表面的競爭吸附與平衡作用，生物分子能發(fā)揮各自的生物學(xué)功能，從而改善表面生物相容性。