補(bǔ)體C5a在細(xì)菌感染性炎癥中對(duì)IL-8分泌的調(diào)節(jié)研究.pdf

1、感染性炎癥是由于機(jī)體組織損傷，致病菌入侵致使機(jī)體在局部或全身范圍表現(xiàn)出的綜合性非特異防御應(yīng)答。感染性炎癥的持續(xù)發(fā)展可使得機(jī)體免疫系統(tǒng)失控，使其病原菌在體內(nèi)迅速繁殖并產(chǎn)生大量毒素，誘發(fā)免疫系統(tǒng)進(jìn)入無(wú)能狀態(tài)并加重組織器官的損傷，由此而產(chǎn)生敗血癥。敗血癥的致死率較高，在西方發(fā)達(dá)國(guó)家，大約每年有一百五十萬(wàn)人患病，死亡率達(dá)30％-50％。
　　 補(bǔ)體(complement，C)是由30余種廣泛存在于血清、組織液和細(xì)胞膜表面的蛋白質(zhì)組成的，

2、具有精密調(diào)控機(jī)制的蛋白質(zhì)反應(yīng)系統(tǒng)，其活化過(guò)程表現(xiàn)為一系列絲氨酸蛋白酶的級(jí)聯(lián)酶解反應(yīng)。補(bǔ)體系統(tǒng)參與機(jī)體的特異性和非特異性免疫機(jī)制，表現(xiàn)為抗微生物防御反應(yīng)，免疫調(diào)節(jié)及介導(dǎo)免疫病理的損傷性反應(yīng)，是機(jī)體應(yīng)答入侵微生物和感染介質(zhì)的第一道防線。
　　 在補(bǔ)體激活產(chǎn)物中C5a是一種具有廣泛生物活性的趨化因子，如參與趨化中性粒細(xì)胞；介導(dǎo)吞噬性細(xì)胞顆粒酶的釋放；調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的分泌如IL-6；擴(kuò)張血管等。而過(guò)度活化的補(bǔ)體C5a能夠?qū)е卵装Y反應(yīng)的過(guò)度

3、放大，導(dǎo)致天然免疫系統(tǒng)的失調(diào)，例如中性粒細(xì)胞的無(wú)功能；血小板激活；直接或間接的微血管損傷。研究證明在實(shí)驗(yàn)性敗血癥中阻斷C5a或者是C5a受體(C5aR/CD88)對(duì)生存率的改善是有積極意義的。
　　 IL-8是一種具有很強(qiáng)趨化活性的細(xì)胞因子，能夠促進(jìn)中性粒細(xì)胞的活化和脫顆粒。由于對(duì)中性粒細(xì)胞很強(qiáng)的趨化活性，IL-8被認(rèn)為在敗血癥的致病過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。Hack等證明在敗血癥病人的血清中IL-8有明顯的升高。IL-8由許多細(xì)胞

4、產(chǎn)生，包括血液中的單核細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞。在疾病的進(jìn)展過(guò)程中IL-8可能通過(guò)趨化過(guò)量的中性粒細(xì)胞達(dá)到炎癥部位而引起組織損傷。在動(dòng)物的敗血癥模型上阻斷小鼠IL-8(也稱為KC，角質(zhì)化細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞因子)之后可以顯著提高早期的生存率。基于IL-8在感染性炎性疾病中的重要作用，深入探討其表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制對(duì)于及時(shí)防治感染性疾病的進(jìn)展有著重要意義。
　　 感染性炎癥過(guò)程中補(bǔ)體C5a發(fā)揮病理效應(yīng)的機(jī)制之一是誘導(dǎo)其它炎癥介質(zhì)的大量釋放。研究

5、數(shù)據(jù)顯示補(bǔ)體C5a在炎癥細(xì)胞因子IL-6、IL-17、TNFα的調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要作用。過(guò)度活化的C5a在感染性炎癥中對(duì)IL-8釋放的調(diào)節(jié)作用和及調(diào)節(jié)途徑、方式是本研究課題所關(guān)注的內(nèi)容。
　　 為了回答上述問(wèn)題，本研究用模擬感染的體外實(shí)驗(yàn)和敗血癥小鼠模型的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)探討了在感染性炎癥中補(bǔ)體C5a對(duì)IL-8的調(diào)節(jié)作用和方式，為深入認(rèn)識(shí)感染性炎癥下C5a的作用機(jī)理，及其與IL-8表達(dá)調(diào)節(jié)的關(guān)系提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 本研究共

6、分為四個(gè)部分：
　　 (1)外源性C5a協(xié)同LPS刺激IL-8產(chǎn)生的效應(yīng)及機(jī)制研究
　　 (2)外源性C5a協(xié)同TLR激動(dòng)劑誘導(dǎo)IL-8產(chǎn)生的效應(yīng)研究
　　 (3)體外感染模型中內(nèi)源性人C5a促進(jìn)IL-8產(chǎn)生的效應(yīng)及機(jī)制
　　 (4)敗血癥模型中過(guò)度活化的C5a對(duì)小鼠IL-8表達(dá)的調(diào)節(jié)效應(yīng)
　　 在體外實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)C5a能夠協(xié)同增強(qiáng)LPS和其它的Toll樣受體激動(dòng)劑刺激全血產(chǎn)生IL-8，MAPK

7、s途徑中的ERK和p38被證明在這個(gè)過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。大腸桿菌K12體外刺激人全血后C5a和IL-8的含量明顯升高，而且在C5a被單抗阻斷之后IL-8的水平明顯下調(diào)。
　　 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，我們采用了經(jīng)典的敗血癥動(dòng)物模型CLP(盲腸結(jié)扎穿孔)。在CLP手術(shù)組我們發(fā)現(xiàn)小鼠IL-8(KC)在mRNA水平上明顯上調(diào)，在用抗體中和C5a之后KC表達(dá)水平明顯下降。
　　 以上研究結(jié)果提示作為炎性因子的IL-8在感染性炎癥的免疫應(yīng)答