荔枝殼貯藏過程中原花青素的穩(wěn)定性及其膽固醇代謝調(diào)節(jié)作用.pdf

1、荔枝是亞熱帶代地區(qū)的主要特色水果，我國是荔枝的主產(chǎn)國。隨著荔枝果汁、果酒和罐頭等加工業(yè)的不斷發(fā)展，荔枝果殼等副產(chǎn)物的數(shù)量不斷增長，充分利用這一資源成為荔枝產(chǎn)業(yè)亟待解決的關(guān)鍵問題。項(xiàng)目組前期研究發(fā)現(xiàn)荔枝果殼含有豐富的原花青素等酚類物質(zhì)，且其原花青素為自然界較少見的A型結(jié)構(gòu)，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的活性。但由于荔枝果殼原花青素包含不同連接方式和不同聚合度的多個(gè)化合物，其抗動(dòng)脈粥樣硬化作用活性差異及其作用機(jī)制尚不清楚。為此，本文

2、在比較了不同貯藏溫度下荔枝果殼中原花青素等酚類物質(zhì)組成、含量及抗氧化活性的變化以確定其貯藏條件的基礎(chǔ)上，通過建立小鼠Raw264.7巨噬泡沫細(xì)胞模型，分析荔枝果殼中原花青素A2、原花青素B2、表兒茶素等不同單體組分對巨噬泡沫細(xì)胞膽固醇代謝的調(diào)節(jié)作用，從調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞膽固醇穩(wěn)態(tài)的角度探討其抗動(dòng)脈粥樣硬化作用機(jī)制，為揭示其量效和構(gòu)效關(guān)系提供基礎(chǔ)。
　?。?）不同貯藏溫度條件下荔枝果殼酚類構(gòu)成普及抗氧化活性的變化：比較30℃和4℃貯藏條件

3、下荔枝果殼總原花青素、總酚、總黃酮、總花色苷及其單體組成的含量變化，發(fā)現(xiàn)荔枝果殼在30℃下貯藏72 h，其酚類物質(zhì)含量和抗氧化活性均顯著下降（P＜0.05），其中總原花青素、總酚、總黃酮、總花色苷含量由84.42、116.95、97.64、1.73 mg/g DW下降至44.07、72.70、53.15、0.48 mg/g DW，分別下降47.80％、37.84%、45.56%、73.02%；其單體酚中表兒茶素、原花青素A2、原花青素B

4、2、咖啡酸、槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、阿魏酸含量由9.83、17.61、4.71、0.76、1.63、0.82 mg/g DW下降至5.04、12.09、2.47、0.44、1.18、0.51 mg/g DW，分別下降48.73%、31.35%、47.56%、42.11%、27.61%、37.80%；其 ORAC和CAA抗氧化活性由1777.01μmolTE/g DW和100.89μmolQE/g DW下降至13

5、60.70μmolTE/g DW和34.30μmolQE/g DW，分別下降23.43%和66.01%；但其酚類物質(zhì)含量和抗氧化活性基本保持50%以上。在4℃貯藏7 d，其酚類物質(zhì)含量和抗氧化活性亦顯著下降（P＜0.05），其中總原花青素、總酚、總黃酮、總花色苷含量由84.42、116.95、97.64、1.73 mg/g DW下降至63.96、93.3、61.33、1.06 mg/g DW，分別下降24.24%、41.26%、37.1

6、9%、20.17%；其單體酚中表兒茶素、原花青素A2、原花青素B2、咖啡酸、槲皮素-3-O-蕓香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、阿魏酸含量由9.83、17.61、4.71、0.76、1.63、0.82 mg/g DW下降至7.26、13.71、2.37、0.61、1.24、0.51 mg/g DW，分別下降19.74%、23.93%、37.80%、26.14%、22.15%、49.68%；其ORAC和CAA抗氧化活性由1777.01μmo

7、lTE/g DW和100.89μmolQE/g DW下降至1463.93μmolTE/g DW和41.67μmolQE/g DW，分別下降17.62%和58.70%；但其酚類物質(zhì)含量和抗氧化活性亦基本保持50%以上，且荔枝果殼經(jīng)4℃貯藏7 d后，其酚類物質(zhì)含量和抗氧化活性基本高于30℃貯藏3 d。由此表明，低溫（4℃）較常溫（30℃）更有利于保護(hù)荔枝果殼中的原花青素等酚類物質(zhì)，荔枝果殼在常溫下僅適合短時(shí)間內(nèi)貯藏，在低溫下可較長時(shí)間內(nèi)貯藏

8、。
　?。?）巨噬泡沫細(xì)胞模型的建立：以Raw264.7巨噬細(xì)胞為研究對象，用30、50、80、100μg/mL四種不同濃度的ox-LDL刺激巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞形成，結(jié)果表明，用100μg/mL ox-LDL刺激巨噬細(xì)胞24 h后，油紅O染色可見細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴明顯增多，細(xì)胞體積明顯增大且伸出偽足，符合泡沫細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征，且與正常細(xì)胞相比，總膽固醇（TC）含量顯著增加，膽固醇酯/總膽固醇（CE/TC）大于50%，提示100μg/m

9、L ox-LDL刺激巨噬細(xì)胞24 h可以成功誘導(dǎo)巨噬泡沫細(xì)胞形成。
　?。?）荔枝果殼原花青素單體組分對巨噬泡沫細(xì)胞膽固醇代謝的調(diào)節(jié)作用：比較不同濃度的原花青素A2、原花青素B2、表兒茶素3種單體對ox-LDL刺激的巨噬泡沫細(xì)胞膽固醇攝入和外流的影響，結(jié)果表明，3種原花青素單體組分均能抑制巨噬細(xì)胞對ox-LDL的攝入，在濃度為40μg/mL時(shí)，原花青素A2、原花青素B2、表兒茶素干預(yù)組其CE/TC的值最小，分別為17.75%、41

10、.76%、36.40%；在低（10μg/mL）、中（20μg/mL）、高劑量（40μg/mL）三個(gè)不同劑量條件下，原花青素A2對巨噬細(xì)胞膽固醇攝入的抑制作用均顯著強(qiáng)于原花青素B2和表兒茶素（P＜0.05），在中（20μg/mL）和高劑量（40μg/mL）條件下，表兒茶素對巨噬細(xì)胞膽固醇攝入的抑制作用強(qiáng)于原花青素B2。同時(shí)，3種原花青素單體組分亦均能促進(jìn)泡沫細(xì)胞膽固醇外流，在濃度為40μg/mL時(shí)，原花青素A2、原花青素B2、表兒茶素干預(yù)

11、組膽固醇外流率最大，分別為49.82%、31.22%、39.09%；在低（10μg/mL）、中（20μg/mL）、高劑量（40μg/mL）三個(gè)不同劑量條件下， 原花青素A2對泡沫細(xì)胞膽固醇外流的調(diào)節(jié)作用均顯著強(qiáng)于原花青素B2和表兒茶素（P＜0.05），表兒茶素對泡沫細(xì)胞膽固醇外流的調(diào)節(jié)作用強(qiáng)于原花青素B2。由此表明，3種不同單體中，原花青素A2抑制巨噬細(xì)胞膽固醇攝入和促進(jìn)泡沫細(xì)胞膽固醇外流活性最強(qiáng)，即其抗動(dòng)脈粥樣硬化活性最強(qiáng)，