超聲波對(duì)β-乳球蛋白結(jié)構(gòu)、免疫特性和美拉德反應(yīng)的影響.pdf

1、β-乳球蛋白（β-lactoglobulin,β-Lg）是牛乳中的一種優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)，氨基酸比例佳，支鏈氨基酸高，且具有與小分子疏水性配體（如視黃醇、脂肪酸等）結(jié)合的能力。但β-Lg同時(shí)也是牛乳中的主要過(guò)敏原，嚴(yán)重影響著消費(fèi)者對(duì)牛奶中營(yíng)養(yǎng)成分的攝取，極大地威脅著過(guò)敏人群尤其是嬰幼兒的身體健康和生長(zhǎng)發(fā)育。因此，如何降低和消除β-Lg的致敏性成為國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。本文以β-Lg為研究對(duì)象，通過(guò)制備抗β-Lg多克隆抗體，建立檢測(cè)牛乳過(guò)敏原β-Lg

2、抗原性的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法。并且采用超聲波和超聲波結(jié)合美拉德反應(yīng)對(duì)β-Lg進(jìn)行改性，研究了改性前后β-Lg結(jié)構(gòu)、抗原性、IgE結(jié)合能力以及功能性質(zhì)之間的變化，結(jié)果表明：
　　1．采用靜脈注射的免疫方法，對(duì)日本大耳兔進(jìn)行免疫，獲得了兔抗β-Lg血清，采用間接ELISA方法檢測(cè)抗β-Lg血清的效價(jià)和western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清的特異性，

3、發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)獲得了效價(jià)高（1:1638400）、特異性好的抗β-Lg血清。采用方正滴定法確定間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA方法的工作條件：抗原包被濃度2μg/mL，抗血清稀釋倍數(shù)1:102400，酶標(biāo)二抗的稀釋倍數(shù)為1:20000，并且得到回歸方程Y=-42.82X+79.62，相關(guān)系數(shù)R2=0.9938，最佳檢測(cè)范圍為0.5~64μg/mL。
　　2.超聲波處理不會(huì)改變?chǔ)?Lg的分子量；超聲波處理使β-Lg的β-折疊含量增加，無(wú)規(guī)則卷曲含量

4、減少，并且β-折疊的百分含量隨超聲波處理時(shí)間和功率的增加呈先增加后降低的趨勢(shì)，而無(wú)規(guī)則卷曲則呈先降低后增加的趨勢(shì)；經(jīng)超聲波處理后，β-Lg的自由巰基含量降低，表面疏水性均增加且隨超聲時(shí)間和超聲功率的增加呈先增加后降低的趨勢(shì)，并在400W15min時(shí)達(dá)到最大，H0為1945；抗原性隨著超聲波強(qiáng)度的增大呈先增加后降低的趨勢(shì)，IgE結(jié)合能力變化不顯著。
　　3.超聲波結(jié)合美拉德反應(yīng)使β-Lg的自由氨基含量顯著下降，分子量向高分子移動(dòng)，且