LOX-1在C反應(yīng)蛋白誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)中的作用.pdf

1、目的：目前C反應(yīng)蛋白(CRP)被認(rèn)為是一種獨(dú)立、強(qiáng)烈的心血管疾病危險(xiǎn)因素，C反應(yīng)蛋白能上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞組織因子(TF)基因的表達(dá)。我們研究凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體-1(LOX-1)在C反應(yīng)蛋白誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)組織因子表達(dá)中的作用，以探討CRP在動(dòng)脈血栓形成中可能的作用的。
　　方法：構(gòu)建人重組質(zhì)粒pTracer CMV2-CRP并將其轉(zhuǎn)染HUVECs細(xì)胞，RT-PCR、Western blot法鑒定CRP

2、在HUVECs中轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平的表達(dá)。再用質(zhì)粒pTracer CMV2-CRP轉(zhuǎn)染HUVECs細(xì)胞，分正常對(duì)照組、空質(zhì)粒GFP組和CRP-GFP組(n=3)，RT-PCR檢測LOX-1、TF的mRNA表達(dá)，Western blot檢測各組LOX-1、TF、P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表達(dá)。CRP-GFP組分別加LOX-1阻斷劑、ERK1/2阻斷劑(U0126)、3NK阻斷劑(SP600125)，We

3、stern blot檢測TF蛋白。
　　結(jié)果：在CRP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的HUVEC細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)綠色熒光蛋白及檢測到CRP的mRNA和蛋白表達(dá)。用表達(dá)人CRP的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HUVECs顯著增加LOX-1mRNA和蛋白表達(dá)(0.70±0.03 vs 0.24±0.01，0.6616±0.0200 vs 0.2558±0.0400，P<0.05)、TF的mRNA和蛋白表達(dá)(0.442±0.04 Ovs 0.146±0.030，0.7274±0.020

4、0 vs 0.2174±0.0200，P<0.05)。CRP激活了ERK1/2 MAPK，未激活JNK MAPK。CRP上調(diào)TF表達(dá)被ERK1/2阻斷劑而非JNK阻斷劑阻斷.抗LOX-1的中和抗體顯著減少CRP誘導(dǎo)的TFmRNA和蛋白表達(dá)(0.264±0.030 vs 0.442±0.040，0.3244±0.0400 vs 0.7274±0.0200，P<0.05)。
　　結(jié)論：構(gòu)建的重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染HUVEC細(xì)胞，CRP基因在